奶粉中三聚氰胺的测定方法.doc

奶粉中三聚氰胺的测定方法发布时间：2008年9月22日GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测
超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺
反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量
固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺
液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺
液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留
GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺

测定方法
本实验中综合各方法稳定性进行比较，主要介绍以下三种：
固相萃取（SPE）方法
HPLC-UV检测方法
LC-MS检测方法（仅供参考）
检测中所需的仪器与条件
Agilent1100高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm，柱温：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm)；缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液：乙腈=85：15；流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm)；流动相：缓冲液：乙腈=85：15；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0;流速：1.0mL/min；
离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技有限公司)
混合型的阳离子交换柱(CleanertPCX60mg/3mL)50支
台式高速（微量）离心机TG16-WS/TG16-W(湖南湘仪离心机仪器有限公司)
（1）角转子:12＊1.5ml；12＊10ml转速≥8000rpm/min，微机控制可定时；常温
（2）离心管：10ml.或1.5ml（一套）
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5％)
三聚氰胺分析方法手册１份

其他试剂
饲料/奶粉样品；甲醇、乙腈；氨水、乙酸铅、三氯乙酸、柠檬酸、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠(Sigma公司)；甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。
理化性质
三聚氰胺:英文名"melamine",简称三胺,学名三氨三嗪,别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3:分子量:126.12
物理性能:白色结晶粉末,无毒,无味;相对密度:1570kg/m3;熔点:在常压下,354℃分解;升华温度：300℃;溶解性:能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性
化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚酸二酰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，处成三聚氰酸二酰胺、三聚握酸一酰胺和三聚氰酸；三聚握胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂，三聚氰树脂是一种多种用途的材料，防水耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防炎纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。
固相萃取（SPE）方法
1固相萃取（SPE）柱的选择：
三聚氰胺呈弱碱性（弱阳离子化合物），净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱（PCX）通过将磺酸基因（-SO3H）键何在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：
1)可通过两种不同溶液的洗涤（水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂），使样品更干净，提高检测的灵敏度。
2)批次重复性好。
3)回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。

图PCX结构式

2样品前处理步骤：
2.1标准样品配制：
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50ml得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液（1%三氯乙酸）稀释至所要的浓度。
2.2提取
称取饲料/奶粉样品5g（或牛奶10ml），加入50ml1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2ml2%乙酸溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10ml离心管中，并将其放置于离心机中，启动离心机使转速达到8000rpm/min离心10min后，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱（PCX）。
2.3净化（PCX小柱，60ml/3ml）：
1）活化及平衡：3ml甲醇，3ml水
2）上样：加入提取液3ml
3）淋洗：3ml水；3ml甲醇：弃去淋洗液并将小柱抽干。
4）洗脱：5ml5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配制：5ml氨水+95ml甲醇）。
5)浓缩：50°C,氧气吹干，20%甲醇/水定容至2ml。HPLC分析或衍生后GC/MS分