生物化学教程蛋白质的性质学习PPT教案.pptx

（一）蛋白质的两性解离和等电点（pI）１、两性游离２、蛋白质的等电点（pI）几种蛋白质的等电点（pI）３、电泳电泳蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。电泳方法：（二）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀蛋白质的胶体性质透析半透膜阻留pr分子，而让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。沉降作用沉降作用Svedberg单位的定义：蛋白质的沉淀3、沉淀方法：①盐析法②有机溶剂沉淀③重金属盐沉淀④某些酸类沉淀一些常见的蛋白质沉淀剂4、应用：（三）蛋白质的变性蛋白质的变性（三）蛋白质的变性介电常数4、变性蛋白质的特征：一些与食品相关的蛋白质的热变性温度/℃蛋白质的变性程度较轻时，去除变性因素后，蛋白质恢复原有空间构象和生物活性的现象称为复性。去除尿素，β-巯基乙醇５、实际应用蛋白质的凝固（四）蛋白质的水解检查蛋白质水解程度的方法：与亚硝酸的反应（五）蛋白质的颜色反应1、双缩脲反应1、双缩脲反应1、双缩脲反应2、与水合茚三酮的反应3、蛋白质黄色反应4、米伦氏反应5、乙醛酸反应6、酚试剂（福林试剂）反应蛋白质的颜色反应蛋白质的颜色反应蛋白质的紫外吸收色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的紫外吸收光谱蛋白质的别构作用酶的别构效应别构酶第六节蛋白质的提取、分离纯化和测定细胞的破碎：细胞破碎蛋白质的分离纯化和鉴定提取理想的提取溶剂应具备下述条件：一般用缓冲液保持pH。可溶蛋白常用稀盐提取，如0.1Mol/LNaCl。脂蛋白可用有机溶剂提取，不溶蛋白用稀碱处理。提取的原则是少量多次。要注意防止植物细胞液泡中的代谢物改变pH，可加入碱中和。
为防止酚类氧化可加5mMol/L维生素C。
加入－SH基的保护剂，防其被氧化。
加碘乙酸可抑制蛋白酶活力，防止蛋白被水解。
加入EDTA，防重金属对蛋白质的破坏。
低温操作。搅拌粗提分离核酸沉淀剂：MnCl2、硫酸鱼精蛋白、链霉素、核酸酶等。
蛋白沉淀剂：醋酸铅、单宁酸、SDS等，也可除多糖，沉淀后应迅速盐析除去沉淀剂，以免目的蛋白变性。
选择变性：用加热、调节pH或变性剂选择性地变性杂蛋白。如提取胰蛋白酶或细胞色素C时，因其稳定性高，可用2.5％三氯乙酸处理，使杂蛋白变性沉淀。分级法盐析后样品中含大量盐类，用透析除去。也可用分子筛，如SaphadexG25层析除盐。如样品过稀，可用冻干、超滤等方法浓缩。精制纯化鉴定参考书：实验:酸性磷酸脂酶的分离、纯化操作步骤实验:酸性磷酸脂酶的分离、纯化操作步骤【目标测试】问题问题问题思考题血浆脂蛋白４、组成特点及功能：教学资源一、蛋白质的功能多样性Edman（苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。

２、蛋白质的等电点（pI）３、电泳电泳蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。半透膜阻留pr分子，而让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。沉降作用蛋白质的沉淀实验:酸性磷酸脂酶的分离、纯化操作步骤