192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析_代.pdf

DOI：CNKI:11-4226/Q.20130114.0829.001网络出版时间：2013-01-1408:29
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生物技术通讯
80LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol.24No.1Jan.,2013
研究报告
doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2013.01.001
表达的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表
达分析miR-192

代晓朋1，李军锋1，张红飞2，张伟1，赵光宇1，于虹1，郭彦1，周育森1
军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京；
1.100071
郑州大学公共卫生学院，河南郑州
2.450001

［摘要］目的：构建表达的重组腺病毒，感染细胞建立高表达的细胞模型，以研究
miR-192HepG2miR-192miR-192
在肝细胞中的功能。方法：将前体基因插入腺病毒穿梭载体，构建穿梭载体
miR-192pAdTrackmiR-192pAdTrack-
，经线性化和同源重组，构建重组腺病毒载体；线性化后，在细胞中进行病毒包装；
miR-192pAd-miR-192QBI-293A
用包装成功的重组腺病毒感染细胞，后收集细胞，提取总，逆转录后进行定量，检测和
HepG272hRNAPCRmiR-192
潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因（）的变化。结果：获得的前体基因，经过穿梭载体后重
1RB1mRNA670bpmiR-192
组构建表达的腺病毒载体；将转染细胞，第细胞病变及荧光的表
miR-192pAd-miR-192pAd-miR-192QBI-293A8d
达结果表明重组腺病毒成功包装；感染细胞后，定量检测表明的表达较对照增加了倍，
HepG2PCRmiR-192835.87
同时检测到细胞中的表达显著降低。结论：构建了高效表达的腺病毒，建立了高表达
RB1mRNAmiR-192miR-192
的肝细胞模型，证明在肝细胞中抑制的是靶分子，为后续在肝细胞中功能的研究奠定了基础。
RB1miR-192miR-192
［关键词］腺病毒载体；基因；肝癌细胞
miR-192
［中图分类号］［文献标识码］［文章编号］（）
Q78;R735.7A1009-0002201301-0001-05
ConstructionofRecombinantmiR-192-expressingAdenovirusand
AnalysisofitsExpressioninHepatocyte

DAIXiao-Peng1,LIJun-Feng1,ZHANGHong-Fei2,ZHANGWei1,
*
ZHAOGuang-Yu1,YUHong1,GUOYan1,ZHOUYu-Sen1
*
1.StateKeyLaboratoryofPathogenandBiosecurity,InstituteofMicrobiologyandEpidemiology,AcademyofMili⁃
taryMedicalScience,Beijing100071;2.CollegeofPublicHealth,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001;China
*Co-correspondingauthors,LIJun-Feng,E-mail:[e-mail];ZHOUYu-Sen,E-mail:[e-mail]

［Abstract］Objective:
ToconstructrecombinantmiR-192-expressingadenovirusandestablishahigh-levelmiR-
Methods:
192expressioncellmodelbyinfectingHepG2formiR-192functionstudy.miR-192genewasampli⁃
fiedfromtheHepG2cellgenomicDNA,anditwasinsertedintotheshuttlevectorpAdTrack.Theconstructed
E.coli
shuttlevectorwaslinearizedandtransformedintoBJ5183toconstructtherecombinantmiR-192-expressing
adenovirusbyhomologousrecombination.Therecombinantadenovirusvectorwaslinearizedandpackagedbytrans