【硕士论文】Bax基因重组腺病毒表达载体的构建及其对包装细胞.pdf

浙江大学硕士研究生学位论文蛑刈橄俨《颈泶镌靥宓墓菇ḿ捌涠园跋赴鸋的毒性作用浙江大学医学院外科学窬饪级硕士研究生陈鹏导师刘伟国教授中文摘要等于年用基因蛋白产物特异性单克隆抗体免疫沉淀等方法从人和鼠赴蟹⑾忠恢钟隑．渤恋淼鞍字剩狟．与促细胞存活的作用相反傧赴劳觥Ｏ赴内虰．谋戎凳怯跋煜赴蛲龅墓丶＝褐柿鱿赴蠦．母弑泶铮珺的相对低表达／壤氖У饔虢褐柿龅淖橹Ъ侗穑琢鲎R颇芰Γ琢錾长速度肿瘤复发以及肿瘤对于放疗化疗的反应性均具有密切关系。如果能够在肿瘤细胞中提高虻谋泶铮ù俳琢鱿赴牡蛲觯岣咧琢鱿赴杂诜帕啤⒒疗的敏感性。人类腺病毒是双链《荆哂凶H景邢赴笠愿郊犹形式存在极少发生插入突变载体操作方便、容易繁殖宿主范围广既可感染分裂细胞又可感染非分裂细胞携带外源基因容量大可表达接近翻译后成熟水平蛋白质等优点复制缺陷性腺病毒由于其在非包装细胞中不能复制避免了对周围正常细胞的感染成为现阶段最好的基因治疗载体之一。我们以复制缺陷性腺病毒为基因转移载体以人类巨细胞病毒早期启动子为真核基因表达启动子以蛭V瘟基因构建重组腺病毒表达载体并且证明其具有较高的目的基因转录和表达活性同时发现由于重组病毒载体谋泶锵扔诓《颈旧砀粗坪包装的发生以及鞍锥杂诎跋赴鸋亩拘宰饔茫贾掳跋赴乃亡而病毒本身尚未完成复制和包装致使病毒扩增受阻不能达到基因治疗所需的病毒浓度。这提示我们在将来的实验中可以通过以可控的启动子代替舳樱使含虻闹刈橄俨《驹诎跋赴鸋赴胁槐泶锘虻捅泶铮苊釨浙江大学附属第二医院浙江大学硕士研究生学位论文蛋白对于细胞的致死性毒性使重组体得以包装和扩增从而得到足够的病毒量进行胶质瘤的基因治疗。实验材料和仪器饕J约粒築基因全序列由浙江大学生命科学学院潘杰教授惠赠为浙江大学生命科学学院生物化学研究所保存畑泶镌靥美国细胞泄蒲г荷虾Ｉ锘в胂赴镅а芯克培养液、培养液、胎牛血清拦鶬阰阳离子脂质体鹗縍公司试剂、约美国公司珺．鼠抗人单克隆抗体、荧光显影试剂盒拦鶶公司备副昙巧窖蚩剐∈驣北┲猩缴锛际跤邢薰拗菩内切酶拦鶱。限制性内切酶珼罅ι锕こ逃邢薰司匝橐瞧鳎型酶标仪依糒二氧化碳生化培养箱拦鶶公司琔紫外分光光度计毡镜航蚬涠忱胄幕德国┰鲆杭州宝诚科技有限公司琘型医用净化工作台罩莩で啪换璞赋。实验方法用一次性塑料培养瓶含％胎牛血清的高糖按常规方法培养细胞每齑ù次。以／盖衟柿＃盖械膒质粒与潘杰教授惠赠的蚪辛臃从Γ訠蚉盖屑āＲ猄疘·盖蠦刈樘澹缬静⒒厥蘸珺钠希踊收的虾鸵丫璓猄疘盖械腁．颍琍鉴定。以同样浙江大学附属第二医院浙江大学硕士研究生学位论文方法构建．