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卵母细胞胞浆内单精子注射成功妊娠1例
作者：姚志伟,王雁林,荣抗美,张冬梅,何秀香
单位：滨州医学院附属医院生殖医学中心滨州市256603
【关键词】辅助生殖；显微授精；单精子注射
卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）俗称第二代试管婴儿，是目前最先进的辅助生殖技术。方法为使用显微操作技术将精子注射到卵细胞浆内，体外培养到早期胚胎，再放回母亲子宫内发育着床。主要用于治疗严重的少精、弱精、畸精和不明原因的不孕症，是目前治疗男性不育的最有效的方法。2008年初，我院生殖中心开展了这项技术，5月初治疗了第一例患者并使其成功受孕，这也是鲁北地区首例经ICSI治疗获得妊娠的患者，现介绍如下。
1临床资料
1.1一般资料接受治疗的夫妇男方32岁，女方31岁，婚后8年未孕。经检查男方患严重的少精症并伴弱精、畸精，精子密度0.73×106/ml，活率25%；活力：a级0%，b级25%，c级0%，d级75%；畸形精子＞90%。双方染色体检查均正常。
1.2方法
1.2.1控制性超排卵：采用常规体外受精胚胎移植（IVFET）超排卵方案，HCG注射36h后经阴道超声引导下取卵，共获卵15枚。
1.2.2精子准备:嘱男方取卵前3d不排精，取卵后即取精，采用直接洗涤离心法处理精液。方法为将精液与等量的含10%血清代用品（SSS）的人输卵管液（HTF）培养液混合，1000r/min离心15min，弃上清，沉淀加HTF(含10%SSS)培养液0.5ml混合，置于5％的CO2培养箱中备用。
1.2.3卵母细胞处理：取出的卵子在HTF(含10%SSS)培养液中培养4h后，每5颗一组依次放入按说明稀释好的透明质酸酶（HYASETM10XVitrolife）液中消化卵丘，去卵丘后共得含有第一极体的成熟卵母细胞12枚进行ICSI受精。
1.2.4显微操作：采用ZEISSAXIOVEVT200倒置显微镜和Eppendorf电动步进显微操作仪。显微固定针和注射针采用HumagenMPHMED35、MIC3535。显微注射前先准备一个Falcon1006培养皿，在皿中央加一个10μlPVP(ICSITMVitrolife)微滴，再取备好的精子混悬液5μl加在PVP的边缘形成交接面，利于精子游入PVP。在皿周围环绕PVP用HTFHEPES培养液做4个5μl微滴，加矿物油覆盖。将卵子移入HTFHEPES培养液滴中，1枚/滴。用显微注射针制动精子尾部，确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子，使第一极体位于6／12点时钟方位，吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸胞浆，见凹陷的卵膜有回弹现象时，说明已刺入胞浆内，即注射精子入胞浆内。退出显微注射针，并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入HTF(含10%SSS)培养液中，置37℃、5％的CO2培养箱中培养24h后，将胚胎再放入IVCONE(含15%SSS)培养液中至胚胎移植。
1.2.5观察受精和评判胚胎质量:显微受精16h后观察受精情况，12颗卵有8颗受精，均为2个细胞核。受精卵继续培养至72h，按BrianDale方法评判胚胎质量：1～2级为优质胚胎，3级为可移植胚胎，4级为劣质胚胎（胚胎碎片＞50%不适合移植）。评定2级胚胎1枚，3级胚胎1枚，4级胚胎6枚。
1.2.6胚胎移植:取卵后72h，将上述2、3级胚胎各一枚移入患者宫腔，移植过程顺利。
1.3结果患者在胚胎移植12d，尿检显示生化妊娠，36d后B超见二个妊囊示临床妊娠，其中一个见胚芽及心管波动，另一个未见。诊断为单胎妊娠。
2讨论
ICSI技术是目前治疗男性不育的最佳方法，是常规试管婴儿技术（IVFET主要治疗女性不孕）的前进和补充。由于该技术可以把单个正常精子用显微注射的方法注入卵母细胞内帮助受精，从而使得患严重少弱精症的病人获得属于自己遗传特性的子代而不必依靠他人供精。部分无精症患者可从睾丸或附睾穿刺取得精子，用ICSI技术完成受精。在临床上，常规IVF受精失败立即用ICSI再受精也是常用的补救措施。自1992年人类首例ICSI试管婴儿诞生以来，该技术在国内外得以广泛开展并日臻完善。
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