酶学第七章多底物酶反应动力学.doc

第七章多底物酶反应动力学
多底物酶占所有酶的一半以上。见下表：
表酶反应按底物数的分类
反应底物数酶类型酶催化反应式占总酶数的%单底物反应异构酶AB5单向一底物反应裂合酶AB+C12假单底物反应水解酶A-B+H2OA-OH+BH26双底物反应氧化还原酶AH2+BA+BH227基团转移酶A+BXAX+B24三底物或多底物反应连接酶X+Y+ATPX-Y+ADP+Pi6X+Y+ATPX-Y+AMP+PPi7.1双底物酶反应机制
7.1.1顺序机制orderedmechanism

此机制有三元复合物生成，大部分脱氢酶属于顺序机制。
7.1.2TheorellChance机制

此机制也属顺序机制，只是没有三元复合物生成。如肝醇脱氢酶，A为NAD+，B为乙醇，P为乙醛，Q为NADH。
7.1.3随机机制randommechanism

许多激酶的催化机制属于此类。
7.1.4乒乓机制pingpongmechanism

转氨酶、转磷酸酶、转酰基酶属于此机制。
7.2双底物顺序反应动力学
7.2.1反应模式

7.2.2速度方程推导
按快速平衡法，如果k4、k5<<k－1、k－2，则总反应的限速步骤为EAB的生成，故可将反应模式简写成：

，
，，
，

分子分母同乘以[A][B]得

，
，，
，

分子分母同乘以[A][B]得

a．当[A]固定，[B]可变时，速度方程可写成：
，此方程形式与米氏方程相同。
b．当[B]固定，[A]可变时，速度方程可写成：

，此方程形式也与米氏方程相同。
7.2.3讨论
a．固定两种反应物中的任一种，都可以使速度方程写成米氏方程的形式；两种反应物浓度都变化时，则不为米氏方程的形式。
b．当[A]固定，[B]可变时，[A]影响表观米氏常数，不影响最大反应速度。
c．当[B]固定，[A]可变时，[B]既影响表观米氏常数，又影响最大反应速度。
7.2.4作图法求动力学参数
7.2.4.1[A]固定，[B]可变时
a．双倒数作图
，
此直线的横轴截距＝。
b．斜率对再作图
斜率＝
此直线的横轴截距＝。
c．横轴截距绝对值的倒数对再作图

此直线的横轴截距＝。
7.2.4.2[B]固定，[A]可变时
a．双倒数作图

在不同的[B]下以对作出不同的直线，
这些直线交于第三象限的一点，交点坐标为，横轴截距＝。
b．纵轴截距对再作图
纵轴截距＝
此直线的横轴截距＝。
c．横轴截距的绝对值对[B]再作图
｜横轴截距｜＝
此直线的横轴截距＝。
7.3TheorellChance机制动力学
7.3.1反应模式

7.3.2速度方程推导
用稳态法处理：
1．，
2．，
…………①，…………②，
①式除以②式得

固定[A]，改变[B]时：

，与米氏方程形式相同。
固定[B]，改变[A]时也类似。