荧光定量PCR简介.ppt
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目录什么是PCRQPCR定义1.3数学原理基线→阈值→CT值→[DNA]0什么是阈值?什么是CT值?PCR扩增的数学模型Ct值与起始浓度的关系标准曲线斜率1.4化学原理化学原理——染料法化学原理——探针法化学原理——探针法探针法与染料法的优缺点几种定量方法的比较几种定量方法的比较定量PCR的实验流程两种仪器图片两种仪器比较荧光定量的应用曲线成弯曲的原因曲线成直线的原因结束
实时荧光定量PCR方法简介.doc
实时荧光定量PCR方法简介实时荧光定量PCR的基本原理理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强
荧光定量PCR.doc
荧光定量PCR荧光定量PCR荧光定量PCR一、样品RNA的抽提1.匀浆将—80℃冻结的RNA提取样品迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状,向研钵中加入与样品匀浆量匹配的适量的RNAisoPlus,并将组织样粉末覆盖。2。抽提室温放置5min,使核蛋白复合物完全溶解后转移至1。5mL无酶离心管中,室温静置5min,12000r/min,4℃离心15min;小心吸取上清液移入新离心管,加上清液的1/5体积量的氯仿,静置10min;12000r/min,4℃离心10m
荧光定量PCR简介、原理、应用 Microsoft Word 文档.doc
荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间,而其应用一直都没广泛展开,究其原因,无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期,尤其是08年以来,仪器和试剂是遍地开花,这也使科研人员均跃跃欲试,都想借此技术使自己的研究能突飞猛进,发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计,在Medline数据库中,用“Taqman”或”realtimePCR”作为关键词检索,1996年是19篇,1999年157篇,到2003年就高达2984篇,2009年会是多少呢?我们不得而知。但其迅猛
一种荧光定量PCR反应液及荧光定量PCR方法.pdf
本发明属于分子生物学技术和实验方法领域,具体涉及一种荧光定量PCR反应液,其特征在于包含PCR反应增强剂,所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种,例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶,优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的