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Real-timeqPCR提要PCR,PolymeraseChainReaction, 聚合酶链式反应,聚合酶连锁反应PCR基本原理:Template:DNA模板 Primer:引物 Buffer:反应缓冲液 dNTPmix:脱氧核糖核苷三磷酸 ddH2O:双蒸水 ThermusaquaticusDNApolymerase:耐热DNA聚合酶6PCR反应参数:实时荧光定量PCR技术1.定义2.定量角度比较:荧光PCR和普通PCR技术1/扩增曲线线性扩增曲线呈现“S”型,分为四个阶段: 从PCR反应动力学过程角度,可以视作引物、模板、酶三者的随机碰撞。 基线期:反应初期,模板的量很小,所以三者碰撞的概率接近0; 指数增长期:随着循环数的增加,累积了足够的碰撞后, 反应进入指数扩增(线性增长期); 平台期:随着引物渐渐消耗,三者的碰撞概率又趋于0,并且伴随着酶反应活性的下降,扩增进入平台期。2/基线3/阈值4/Ct值—扩增曲线分析和起点定量的关键:4.基本原理—定量原理5.基本原理—常用的荧光标记方法1/SYBRGreenI荧光染料SYBRGreenI工作原理2/Taqman水解型杂交探针3/MolecularBeacon分子信标变性时: 产生非特异性的荧光荧光标记荧光信号的产生“实时PCR”指不开盖测定核酸6.主要仪器类型ABIReal-TimePCRInstruments: http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/zh/CN/adirect/lt?cmd=IVGNcatDisplayCategory&catKey=3001MingzhiL,2013-01-24MingzhiL,2013-01-24Thanksforyourattention!