抗双链DNA(dsDNA)抗体检测试剂盒.doc

北京和杰创新生物医学科技有限公司

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抗双链DNA（dsDNA）抗体检测试剂盒
（间接免疫荧光法）
说明书
【产品名称】
中文名称：抗双链DNA（dsDNA）抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）
英文名称：DetectionKitforAnti-doublestrandedDNAAntibody（IndirectImmunofluorescence）
【包装规格】
30人份/盒；50人份/盒；100人份/盒。
【预期用途】
北京和杰创新生物医学科技有限公司生产的抗双链DNA（dsDNA）抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法），用于定性检测人血清或血浆中的抗双链DNA（dsDNA）抗体，辅助诊断系统性红斑狼疮。
【检测原理】
本试剂盒采用间接免疫荧光法（IndirectImmunofluorescence，IIF）检测抗dsDNA抗体，抗原为培养好的短膜虫，在与病人待测血清反应后，加入荧光素（FITC）标记的兔抗人IgG抗体，最终在荧光显微镜下观察结果。
【主要组成成分】
序号组成剂型规格数量1dsDNA抗原片固体3人份/张（30人份）、5人份/张（50人份）、10人份/张（100人份）10张2荧光二抗液体1mL/支（30人份）、1.5mL/支（50人份）、3mL/支（100人份）1支3抗dsDNA阳性对照液体0.3mL/支1支4抗dsDNA阴性对照液体0.3mL/支1支5封片剂液体4mL/支1支6吐温液体2mL/支2支7PBS粉剂固体12.2克/袋2袋8盖玻片固体15片/盒1盒9使用说明书——1份1份其中，dsDNA抗原片主要组分为绿蝇短膜虫；荧光二抗主要组分为FITC标记的兔抗人IgG。
【储存条件及有效期】
2-8℃避光保存，有效期6个月。
【样本要求】
人血清或血浆，要求清亮、无沉淀、无黄疸；
样本1周以内检测可在4℃条件下贮存。
【检验方法】
1.准备：取出dsDNA抗原片，待其恢复至室温后剪开包装。将洗涤用的PBS粉剂用蒸馏水溶解至1L，加入2ml吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。
2.稀释：待测血清用洗涤液作1:10稀释。
3.加样：在抗原片的反应孔内分别加入稀释好的血清和阴阳性对照，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。
4.孵育：将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。
5.洗涤：取出抗原片，用洗涤液轻轻从一侧将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置5min后，再用蒸馏水冲洗1次。
6.加样：在抗原片的反应孔内加入dsDNA荧光二抗，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。
7.孵育：用纸擦去抗原片周边和反面多余液体后，将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。
8.洗涤：重复步骤5。
9.封片：在盖玻片上滴加封片剂。用纸擦干抗原片周边和反面多余液体后，将载片的抗原基质朝下置于准备好的盖玻片上，完成封片。
10.结果观察：荧光显微镜下观察结果。
【参考值（参考范围）】
dsDNA阴性时短膜虫虫体轮廓清晰，附有鞭毛，虫体内无荧光；阳性时核与动基体表现为均质或环状荧光，成对出现。
【检验结果的解释】
显微镜下可见均匀密布的短膜虫，阴性时虫体轮廓清晰，附有鞭毛，虫体内无荧光，有时鞭毛附着点会有弱的非特异点状荧光。
阳性时核与动基体表现为均质或环状荧光，成对出现。核较大，位于虫体一端；动基体较小靠近鞭毛端且居中（有时似突出虫体外），虫体轮廓常因荧光相衬而消失。
【检验方法的局限性】
该试剂盒只提供抗dsDNA抗体的检测结果，具体病情及诊断应由临床医生结合临床表现和其他信息综合判断。【产品性能指标】
阳性符合率：从室内阳性质控品P1-P10（共计10份阳性血清标本）中随机抽取3支用试剂盒进行检测，其检测结果均为阳性。
阴性符合率：把两只阴性质控血清（N14-N15）和从室内阴性质控品13份（N1-N13）室内阴性质控品中随机抽取的3支用试剂盒进行检测，其检测结果均为阴性。
批内重复性：用试剂盒测定1份室内阳性质控品，重复检测5孔，其检测结果均为阳性。
批间重复性：用3个批号的试剂盒测定1份室内阳性质控品，每批重复检测5孔，其检测结果均为阳性。
最低检出限：用企业内部检出限参考品对试剂盒进行检测，在dsDNA参考品滴度为1：100时，结果应为阳性。
【注意事项】
建议在400倍镜下观察结果。
本试剂盒仅作定性检测。
对照血清经检测HBsAg、抗HCV抗体、抗HIV抗体均为阴性，但试剂盒的所有组分都应视作潜在传染源小心处理。
【参考文献】
1.AlbaP,BentoI,CuadradoMJ,etal.Anti-dsDNA,anti-Smantib