抗心磷脂体抗体检测.doc

抗心磷脂体抗体检测
1.检验目的
用于体外定性检测人血清或血浆中抗ACA-IgG、IgM、IgA的水平。
2.方法原理
包被纯化的心磷脂抗原与待测样品中的ACA-IgG、IgM结合，加入酶标抗体后，形成复合物，后者与底物作用呈显色反应，在450nm处测定其吸光度（OD）值，反映样品中ACA-IgG、IgA、IgM水平是否正常。
3性能参数
阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检测限符合最低检出限的检出要求，精密度CV（%）不高于15%，37℃放置6天产品性能稳定。
4.始样品系统
1标本类型：血清或血浆
2采血严格按照静脉采血的通用规则。
3样本在离心前，须凝固充分。
4．4不能使用在室温下放置超过8小时的样本。
4．5如果检测不能在8小时内完成，要将瓶盖紧闭，并存于2—8℃保存。
6如果样本在48小时内不检测，将样本血清冻存于-20℃。
7样本只能冻融一次。
8加样前样本须无纤维、气泡及其它物质。
9标本的拒收：严重溶血、脂血、血量不够、三查三对不合格者拒收。
5容器和添加物的类型
无抗凝剂的红色或黄色胶头真空试管。
EDTA、肝素抗凝的紫色、绿色胶头真空试管。
6设备和试剂
6.1分析仪器：酶标分析仪：TECAN公司
移液器：5μl～450μl移液器
恒温水浴箱：上海一恒公司的CU420
微孔振荡器：
分析试剂:ASKIELISA法检测试剂盒
6.2组成：
6.2.1纯化抗原包被反应条：室温平衡30分钟方可拆开包装
6.2.2酶结合物：用于酶联反应
6.2.3阳性对照：用于阳性对照反应
6.2.4阴性对照：用于阴性对照反应
6.2.5样本稀释液：用于稀释样本
6.2.5浓缩洗涤液：用前以蒸馏水作30倍稀释
6.2.6底物A：用于显色反应
6.2.7底物B：用于显色反应
6.2.8终止液：用于终止显色反应
6.3试剂保存与有效期
6.3.1新购试剂保存于2-8℃，勿冷冻，在有效期内使用。
6.3.2若有剩余试剂，应立即放回冰箱，保存于2-8℃。
7程序步骤
7.1将血清标本编号,使用前用稀释液按1：100比例稀释，在LIS系统中登记化验单姓名，性别、年龄、科室、住院号等。
7.2配制应用洗涤液：每瓶浓缩洗涤液加蒸馏水至240ml，混匀，装入洗瓶中待用。
7.3根据被检标本的多少将微孔条固定于支架，用加样器在每孔中加入100ul稀释混匀好的样本（空白对照1孔，阳性对照1孔及阴性对照1孔），置37℃孵育30分钟。
7.4弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置30秒，甩干，重复3次后拍干。
7.5每孔加酶结合物100ul，振荡均匀，置37℃30分钟。
7.6洗涤：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置30秒，甩干，重复3次后拍干。
7.7每孔加底物A、B各50ul（1滴），振荡混匀，置37℃15分钟。取出后每孔加终止液1滴。
7.8用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。
8质量控制程序
每块板必须进行阴阳对照的检测，以确保每块板的可靠性。
9实验的干扰因素
血红蛋白浓度为10mg/ml的溶血、甘油三酯浓度为20mg/L的脂血、胆红素浓度为0.4mg/ml的黄疸对检测结果没有干扰。
10结果计算程序的原理
样本OD值/阴性对照平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.10作0.10计算，高于0.10按实际OD值计算。
11生物参考区间
阴性
12检验结果可报告区间
阴性、阳性
13实验室解释
该方法适用于定性检测和辅助诊断。
当结果为阳性时需同时结合患者的临床体征或进一步结合其它方法来进行。
14.临床意义
常见于系统性红斑狼疮（SLE）及其他自身免疫性疾病。该抗体与血栓形成、血小板、自然流产或宫内死胎关系密切。
15安全防护
对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。
一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。
其他安全防护措施参见本实验室生物安全手册
16常见的误差源
仪器原因：仪器的性能、仪器的校准等。
试剂原因：试剂过期、微孔板被污染等。
标本原因：标本处理、收集不符合要求等。
人为原因：结果填写错误等。
17注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡30分钟后方可使用，未用完的微孔板用自封袋密封2-8℃保存。
酶标板洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗净。应设定30-60秒的洗液浸泡时间。
滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀，并弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确（注意：勿将试剂滴在孔壁上）。
所有样品和废弃物都应按传染源处