实验二差速离心法分离纯化蛋白质.doc
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实验二差速离心法分离纯化蛋白质一、实验目的1、了解离心机的种类及结构,并能熟练操作。2、掌握离心机的使用方法及注意事项。3、掌握差速离心法分离纯化可溶蛋白质的原理及技术。4、掌握电子天平的使用方法。二、实验原理1、离心技术:根据颗粒在作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来的一种分离技术。当物体围绕一中心轴做圆周运动时,运动物体就受到离心力的作用。旋转速度越高,运动物体所受到的离心力越大。如果装有悬浮液或高分子溶液的容器进行高速水平旋转,强大的离心力作用于溶剂中的悬浮颗粒或高分子,会使其沿着离
01-蛋白质的表达、分离、纯化实验.doc
蛋白质的表达、分离、纯化实验蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。实验材料:大肠杆菌BL2
01-蛋白质的表达、分离、纯化实验.doc
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/experiment/79.htm"蛋白质的表达、分离、纯化实验蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实
蛋白质的分离纯化.ppt
第9章酶促反响(fǎnyìng)动力学1、酶活力与酶促反响速度酶活力:在一定条件下酶催化某一反响的反响速度(sùdù)〔一般测初速度(sùdù)〕。酶促反响速度:单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。单位:浓度/单位时间研究酶促反响速度(fǎnyìngsùdù)以酶促反响的初速度为准(底物消耗≤5%〕。2、酶的活力单位〔U〕国际单位〔IU单位〕:在最适反响条件下每分钟催化1μmol底物转化为产物(chǎnwù)所需的酶量称一个国际单位〔IU〕
蛋白质分离纯化步骤.doc
一、蛋白质分离纯化的一般原则大多数蛋白质在组织细胞中都是和核酸等生物分子结合在一起,而且每种类型的细胞都含有成千上万种不同的蛋白质。许多蛋白质在结构、性质上有许多相似之处,所以蛋白质的分离提纯是一项复杂的工作。到目前为止,还没有一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来。但是对于任何一种蛋白质都有可能选择一种较合适的分离纯化程序以获得高纯度的制品。且分离的关键步骤、基本手段还是共同的。蛋白质提纯的目的是增加产品的纯度和产量,同时又要保持和提高产品的生物活性。因此,要分离纯化某一种蛋白质,首先