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SpragueDawley(SD)大鼠骨髓间充质干细胞说明书

细胞名称：大鼠骨髓间充质干细胞

品系：大鼠
SD

细胞描述：取自3-6周的大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用
SDSD

大鼠间充质干细胞完全培养基（以下简称MSC完全培养基）贴壁培养，

传代扩增至第二代冻存。本批次细胞经检测，具备分化成为脂肪、成

骨、软骨的能力，建议使用P5代之前的细胞进行分化实验。

批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识

细胞倍增周期：20-30小时

细胞形态:

图1：P2Rat（SD）MSC

细胞培养条件与方法：见附件1“细胞培养液及复苏、传代、冻存条件”

细胞分化条件与结果：见附件2“三向分化检测”

附件1：细胞培养液及复苏、传代、冻存条件

细胞培养液：

MSC完全培养基成分：
成分浓度货号
1×Gibco32571
α-MEMmediumwithGlutaMAX?-I
FBS10%BiochromS0115
PenStrep1%Gibco15140

MSC冻存液
成分浓度货号
60%Gibco32571
α-MEMmediumwithGlutaMAX?-I

FBS30%BiochromS0115
DMSO10%SigmaD2650

消化液：
MSC0.05%Trypsin-EDTAGibco25300

1×PBS：Gibco14190

建议复苏培养体系：T25培养瓶

传代频率：3-7天，待细胞生长到80%-90%满时进行传代

复苏及传代：

复苏

1.将MSC完全培养基37℃水浴加热。

2.将细胞从液氮中取出，37℃水浴迅速解冻，转移到超净台，打开前用75%酒精
擦拭冻存管及管口。

3.准备一根15ml离心管，加入预热的MSC完全培养基5ml，打开冻存管，将细
胞加入离心管中，混匀。

4.1000rpm，离心5min。

5.吸除上清，加入2mlMSC完全培养基，吹匀。

6.复苏到细胞培养瓶中，加入预热的完全培养基。
T25MSC6ml

7.摇匀后放入5%CO2培养箱中培养。

8.每3-4天换液。

传代

1.培养3-7天，待细胞生长至80%-90%满时进行传代。及时传代，不要过密生

长。

2.传代时先将细胞培养液吸除，然后加入×1PBS2ml洗一次。

3.吸除PBS，加入2ml预热的0.05%Trypsin-EDTA，使Trypsin-EDTA覆盖细胞
表面，放入培养箱，消化2min。（使用预热的Trypsin-EDTA，消化时间控制
在2-3min以内）

4.取出细胞，加入完全培养基，轻轻冲洗。将细胞悬液转移到
4mlMSC15ml

离心管中。

5.1000rpm，5min。

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6.离心后计数，按照2×10/cm的密度进行传代，放入5%CO2培养箱中培养。

7.每3-4天换液，待细胞长到80%-90%满时进行传代。

冻存

1.待细胞生长至80%-90%满时按照传代的方法消化下细胞，计数，按照每管
0.5×106进行冻存，加入1×MSC冻存液，每管体积约500ul。

2.放入程序降温冻存盒中，置于-80℃冰箱过夜，第二天转移到液氮中。

（我库冻存时，每支冻存管约含0.5106细胞量，体积为500μl，预期存活率
70%，建议复苏至1个T25培养瓶中。）

附件2：三向分化检测

三向分化检测：

具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力，本批次细胞按下列流程
MSCMSCP2

进行三向分化能力检测。

脂肪分化：

1.待MSC生长到80%-90%满，按照正常传代的方法，消化下计数，按照2x104/cm2

铺6孔板或12孔板。

2.使用MSC完全培养液培养2-3天，待细胞长到90%-100%满时更换为脂肪分化培

养液，分化12-20天。

3.进行油红染色。

图1：Rat（SD）MSC脂肪分化16天，红色为细胞形成的脂滴

成骨分化：

1.待MSC生长到80%-90%满，按照正常传代的方法，消化下计数，按照
2x104/cm2铺6孔板或12孔板。

2.使用MSC完全培养液培养2-3天，待细胞长到80%满时更换为MSC成骨分化
培养基，每3-4天换液，至少培养21天。

3.进行茜素红染色。

图2：Rat（SD）MSC成骨分化21天，红色为细胞钙结节

软骨分化：
4x105细
1.待MSC生长到80%-9