猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIIA基因的真核 表达及.pdf

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13(5):616~619
·研究论文·
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素
基因的真核表达及其核酸疫苗*
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贝为成严琳何启盖肖少波陈焕春**
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(华中农业大学动物医学院动物病毒室，武汉430070)
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摘要：利用PCR从自行分离鉴定的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(,APP)血清7型菌株基
因组DNA中扩增基因，构建了一个利用人类巨细胞病毒(,HCMV)启动子表达基因的
真核表达质粒pCD，体外转染PK-15细胞，处理后的样品进行SDS-PAGE和Westernblot分析，证实了免疫原性蛋白
apxA在细胞中表达。用表达质粒pCD作为核酸疫苗免疫BALB/c小鼠酶联免疫吸附试验，ELISA检测小鼠血清中
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特异性抗猪胸膜肺炎放线杆菌的抗体，结果第2次免疫后其抗体滴度都在1128以上。初步证实，用作为核酸疫苗免
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疫动物可以激活机体产生免疫应答反应。
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关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌；基因；表达；核酸疫苗；免疫应答
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EukaryoticExpressionandDNAImmunizationofGeneof
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Porcine
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BEIWei-ChengYANLinHEQi-GaiXIAOShao-BoCHENHuan-Chun**
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genewasamplifiedfromgenomicDNAandeukaryoticexpressionrecombinantplasmid,pcDcontain-
ingtoxingeneofwasconstructed.Theexpressionofforeigngenewaspromotedbyimme-
diate-earlyenhancer/promoterof(HCMV).TheplasmidwastransfectedintoPK-15cell.Expressed
proteinwasdetectedbySDS-PAGEandWesternblottingassay.TherecombinantplasmidwasalsousedasDNAvaccinetoinject
BALB/cmiceintramuscularlywith100g/mouse.Theimmunizationwasboostedatthe2ndweekafterfirstinjection.Theantibodyti-
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tleweremeasuredbyindirectELISAandhigherthan1128.CollectingtheseresultsshowedthatthegeneasDNAvaccineto
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immunityanimalcouldinduceprotectiveimmunitytobody.
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porcine;gene;expression;DNAvaccine;immunityresponse
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猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌2001;Baltes.,2001;,Inzana.,1993)。其中
(,APP)引起的一细菌外毒素是最主要的毒力因子。
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种严重危害养猪业的呼吸道传染病，该病以胸膜肺Apx是胸膜肺炎放线杆菌分泌的外毒素之
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炎和出血性坏死肺炎为特性，具有高发病率和死亡一。操众子包括激活基因C和结构毒素基因
率，特别是在青年猪中(Cai，2001)。目前已经证实，A。有活性的ApxA毒素的产生和分泌需要激活
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该病原菌引起猪致病有许多致病因子，包括细胞外基因C。毒素蛋白ApxA是一种主要的免疫性蛋
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毒素、外膜脂蛋白、脂多糖、荚膜多糖、Cu-Zn超氧化白之一。它位于操纵子结构基因区域，是
物酶、转铁结合蛋白等(Ward.,1998;Choi.,APP刺激机体产生免疫应答的免疫原性蛋白之一

*基金项目：国家自然科学基金(No.30200011)和湖北省科技攻关项目(No.2001AA201B02)基金资助。
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贝为成：男，1976年生，博士研究生。
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**通讯作者。Authorforcorrespondence.Tel./Fax:[phone];E-mail:<[e-mail]>.
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收稿日期：2004-06-20接受日期：2004-11-02

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第5期贝为成等:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素基因的真核表达及其核酸疫苗617
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P1：5'-GTCGGATCCATGTCAAAAATCACTTTGT-3'；
(Oswald.,1999)。人们将激活基因失活郅
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后构建重