应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽.pdf

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应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽

顾颖张军王颖彬李少伟杨海杰罗文新夏宁邵"

（厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，厦门&#!%%2）

摘要以识别戊型肝炎病毒（C9’）构象依赖性中和表位的单克隆抗体3D!!、3C&作为固相筛选分子，对噬菌体
随机E肽库进行6轮筛选后，随机挑取单克隆噬菌体进行测序。合成优势E肽序列基因，将其插入CFBG?GGE313&
位置之中，进行原核表达，所获重组蛋白经蛋白印迹实验证实可与相应单抗结合，电镜下可见重组蛋白能形成与
CFBG?相似的类病毒颗粒。化学合成单抗3C&筛选出的优势E肽，所获E肽经生物传感器结合实验证实与单抗
3C&结合。这些结果提示用噬菌体E肽库可以筛选出部分模拟构象性表位的短肽，为亚单位疫苗的研制提供了新
的思路。

关键词戊型肝炎病毒，中和表位，噬菌体肽库
中图分类号H2!#文献标识码G文章编号!%%%1&%#（!$%%&）%#1%#3%1%#

戊型肝炎（）是一种由引起的经消化道
C9C9’材料与方法
传播的急性散发型肝炎，约占我国急性散发型肝炎!
［］
的!2IJ$%I!。C9’是一种无包膜二十面体对!"!单克隆抗体
称结构的病毒，其基因组为EK2L/左右的单链正义抗C9’中和性单克隆抗体3D!!、3C&由本实验
［，］
M+G，包含了&个开放读码框（NM4）。其中NM4!编室制备62。
码的!#"&个氨基酸的多肽，可识别甲基转移酶、木!"#单抗模拟肽的筛选
瓜酶样蛋白酶、解旋酶、M+G依赖的M+G聚合酶，此噬菌体随机E肽库及受体菌3*0(,#9M$E&3购
外还存在碱基配对的超变区域；NM4$编码的##%个于美国+-O9;?)7;AF:(P7/<公司。其生物淘洗操作
氨基酸的多肽，为病毒主要结构蛋白，组成病毒衣按使用手册的要求进行，大致如下：将单克隆抗体
壳；编码的个氨基酸的小肽。、（）分别包被在微孔板上，用
NM4&!$&C9’NM4$3D!!3C&!%%!?Q.P$I
［］
编码的结构蛋白中含有保护性表位$。最近我们在胎牛血清白蛋白（FRG）封闭后，将噬菌体肽库原液
大肠杆菌中表达了一个具有很强免疫保护性的!S!%稀释后加入微孔中，室温静置!T；UFR5（含
重组蛋白，并从免疫后的单克）洗涤遍；用
C9’NM4$+9$+9$%K!I5O--;$%!%!%%!P!%..()QPV)W1D)
隆抗体中筛选出了两个中和单抗3D!!和3C&，分别（XC$K$）洗脱结合的噬菌体，室温轻微震荡!%.:;；
识别病毒衣壳表面的个构象依赖性表位［&JE］。本加入（）中和洗脱液，并
$!2!P!.()QP50:<1CD)XC"K!
研究利用噬菌体随机E肽库筛选C9’中和单抗将噬菌体洗脱液接种到$%.P新鲜培养的3*0(,#
3D!!和3C&所识别表位的模拟肽，并利用乙型肝炎9M$E&3培养液中，&EY振荡培养6K2T，6Y2%%%0Q
核心抗原（CFBG?）作为短肽表位的展示载体，结合.:;离心!2.:;，收集上清，加入!Q#体积的聚乙二
合成肽技术验证模拟肽的活性，为C9’亚单位疫苗醇（U9V）Q+7D)溶液（$%IU9V3%%%，$K2.()QP+7D)），
的研制奠定基础。混匀后6Y沉淀过夜。6Y!%%%%0Q.:;离心$2.:;，
用!.PUFR重悬沉淀，收集扩增后的噬菌体，并按
照上述方法用U9VQ+7D)再次沉淀提纯噬菌体，最终

收稿日期：$%%&1%21$&，修回日期：$%%&1%31$!。
基金项目：福建省科技重大项目（+(*$%%$4%!&），教育部跨世纪优秀人才培养计划。
"通讯作者。5-)：3#12"$1$!36!!%；478：3#12"$1$!36!!%；91.7:)：;<8:7=>:;?8:7;*8.@*-A@*B;
期顾颖等：应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽
FFB8

用重悬沉淀，保存。按常规方法滴定
!""!#$%&’(
洗脱液中噬菌体。将包被用单抗的浓度降低至
，同时把洗涤用中的浓度提
)"!*+,#$%&--.//0!"
高到"1)2，按上述步骤再淘洗3次。经过’次淘洗
后，随机挑取各单抗筛选出的单克隆蓝色噬菌斑，提
取单链456测序。783单链456抽提纯化试剂盒
购于上海华舜生物工程有限公司。基因测序由上海
博亚公司完成。
!"#模拟肽重组表达载体的构建
重组表达载体9:8’;<,=>为本实验室所构建。
该载体利用?