对噬菌体肽库的筛选方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103614780103614780A(43)申请公布日2014.03.05(21)申请号201310539950.7(22)申请日2013.11.05(71)申请人辛竹地址116000辽宁省大连市西岗区中山路222号血液净化中心(72)发明人辛竹(51)Int.Cl.C40B50/06(2006.01)C40B40/10(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书2页说明书2页(54)发明名称对噬菌体肽库的筛选方法(57)摘要本发明公开了对噬菌体肽库的筛选方法，将目的Sm单抗用碳酸氢钠包被缓冲液，以1:5的比例进行稀释，3-5摄氏度湿盒过夜；然后用百分之二十以上的脱脂牛奶对其进行封闭，时间不少于2小时；振荡洗涤；过滤；轻咬振荡，直至噬菌体全部结合；筛选未结合的噬菌体，将其吸出，并弃去；滴入酸碱中和液，对洗脱液进行滴度测定；上述步骤反复三次；计算每一轮免疫筛选后噬菌体的回收率即可；过滤的时候，需要轻取轻放，用三层纱布进行；所述酸碱中和液在使用前需要在零下四度的冰柜中进行预冷。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，可以准确进行筛选，重复操作性强，筛选精确。CN103614780ACN1036478ACN103614780A权利要求书1/1页1.对噬菌体肽库的筛选方法，其特征在于，将目的Sm单抗用碳酸氢钠包被缓冲液，以1:5的比例进行稀释，3-5摄氏度湿盒过夜；然后用百分之二十以上的脱脂牛奶对其进行封闭，时间不少于2小时；振荡洗涤；过滤；轻咬振荡，直至噬菌体全部结合；筛选未结合的噬菌体，将其吸出，并弃去；滴入酸碱中和液，对洗脱液进行滴度测定；上述步骤反复三次；计算每一轮免疫筛选后噬菌体的回收率即可。2.如权利要求1所述的对噬菌体肽库的筛选方法，其特征在于，过滤的时候，需要轻取轻放，用三层纱布进行。3.如权利要求1所述的对噬菌体肽库的筛选方法，其特征在于，所述酸碱中和液在使用前需要在零下四度的冰柜中进行预冷。2CN103614780A说明书1/2页对噬菌体肽库的筛选方法技术领域[0001]本发明涉及生化实验领域，具体涉及一种对噬菌体肽库的筛选方法。背景技术[0002]红斑狼疮为全身性、慢性进行性反复发作和缓解的典型自身免疫性结缔组织病之一。女性发病多，可侵犯全身多脏器，免疫学技术的发展使早期轻型和不典型的病例能及时诊治，因此除少数重症或重要器官受损者外，有些病例可自行缓解，有些只呈一过性发作，经数月或短暂病程后，症状完全消失。治疗上由于合理应用皮质类固醇激素、免疫调节剂、血浆交换疗法、中西医结合等，红斑狼疮患者的十年存活率已达85%。近年有人认为本病为一病谱性疾病，其两极为局限性盘状红斑狼疮和系统性红斑狼疮，中间为亚急性皮肤型红斑狼疮和深部红斑狼疮，二者均可向两端演变。LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。发明内容[0003]本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案：对噬菌体肽库的筛选方法，将目的Sm单抗用碳酸氢钠包被缓冲液，以1:5的比例进行稀释，3-5摄氏度湿盒过夜；然后用百分之二十以上的脱脂牛奶对其进行封闭，时间不少于2小时；振荡洗涤；过滤；轻咬振荡，直至噬菌体全部结合；筛选未结合的噬菌体，将其吸出，并弃去；滴入酸碱中和液，对洗脱液进行滴度测定；上述步骤反复三次；计算每一轮免疫筛选后噬菌体的回收率即可。[0004]本发明中，过滤的时候，需要轻取轻放，用三层纱布进行。[0005]本发明中，所述酸碱中和液在使用前需要在零下四度的冰柜中进行预冷。[0006]本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，可以准确进行筛选，重复操作性强，筛选精确。具体实施方式[0007]对噬菌体肽库的筛选方法，将目的Sm单抗用碳酸氢钠包被缓冲液，以1:5的比例进行稀释，3-5摄氏度湿盒过夜；然后用百分之二十以上的脱脂牛奶对其进行封闭，时间不少于2小时；振荡洗涤；过滤；轻咬振荡，直至噬菌体全部结合；筛选未结合的噬菌体，将其吸出，并弃去；滴入酸碱中和液，对洗脱液进行滴度测定；上述步骤反复三次；计算每一轮免疫筛选后噬菌体的回收率即可，过滤的时候，需要轻取轻放，用三层纱布进行，所述酸碱中和液在使用前需要在零下四度的冰柜中进行预冷。[0008]以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，3CN103614780A说明书2/2页任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围