噬菌体随机肽库中与受损内皮细胞特异性结合短肽的筛选X.doc

噬菌体随机肽库中与受损内皮细胞特异性结合短肽的筛选X（完整版）实用资料
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第29卷第6期
南华大学学报・医学版2001年12月噬菌体随机肽库中与受损内皮细胞特异性结合短肽的筛选
郭玉1,王芳宇2,唐圣松1,廖端芳△
(1.南华大学药物药理研究所,湖南衡阳421001;2.南华大学生物化学教研室)Ξ
摘要:目的筛选与受损内皮细胞特异性结合的短肽。方法以氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)损伤牛胸主动脉内皮细胞,用丝状噬菌体(FUSE5)表面展示的随机6肽和15肽文库进行混合筛选,通过DNA序列测定确定其插入的氨基酸序列。结果经过3轮筛选,得到一些特异性结合的噬菌体克隆,随机挑选10个克隆,进行DNA序列分析,其中8个克隆含6肽序列,2个克隆含15肽序列。结论用噬菌体技术能筛到与受损内皮细胞亲和力高、结合力强的特异性短肽。
关键词:噬菌体多肽文库;生物淘选法;内皮细胞
中图分类号:Q343.1文献标识码:A文章编号:1000-2510(2001)06-0535-04
ScreeningthePeptidesSpecificallyBindingtheInjuredEndothelial
CellwithTwoPhage-DisplayedRandomPeptideLibraries
GUOYu,WANGFang-yu,TANGSheng-song,LIAODuan-fang
(TheInstituteofPharmacyandPharmacology,NanhuaUniversity,Hengyang,Hunan421001,China)
AbstractObjective:Toscreenthepeptidesspecificallybindingtheinjuredendothelialcell(EC)bymeansofboth6-merand15-merpeptideslibrariesdisplayedonthesurfaceoffilamentousbacteriophage(FUSE5).Methods:Culturedcalfaorticendothelialcellswereinjuredbyincubatingwithoxidizedlowdensitylipoprotein(ox-LDL)for4hours.ThebindingphagetoinjuredECwasobtainedbythreeroundsofscreeningandtheinsertedaminoacidsequencesofdisplayedpeptideswasconfirmedbyDNAsequences.Results:Weprimarilyisolatedtenphageclonesfromtwophagedisplaylibraries.Analysisofpeptideshowsthateightclonesinclude6-mersequenceandtwoclonescontain15-mersequence.Conclusion:WeobtainedthepeptidesspecificallybindingwithhighaviditytoinjuredECbythephage-dis2playedapproach.
Keywordsphage-displayedlibrary;micropanning;endothelialcell
噬菌体多肽文库是利用噬菌体表面表达技术
(phagedisplaytechniques,PDT)在体外条件下构建的
多肽文库,将编码外源肽可变区DNA片段插入噬菌
体基因组中,以融合形式与噬菌体的表面蛋白共同
表达于噬菌体表面。外源蛋白基因为随机合成的寡
核苷酸,具有多种多样的排列方式,其表达的氨基酸
序列也是多种多样的,几乎可以包括自然界中任意
一种短肽的排列方式。表达在噬菌体外壳上的蛋白

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特异性结合的短肽,以该短肽作为先导分子,经过进一步优化,可用于受损内皮细胞标志物9和治疗药物筛选研究。
1材料与方法
1.1材料噬菌体展示的FUSE5随机6肽及15
肽文库由美国Missouri大学G.P.Smith教授惠赠,文库容量均为1×109
;KanK91四环素抗性的F+
大肠杆菌;胶原酶、胰酶为Sigma公司产品;饱和酚、乙醇
等均为国产分析纯产品;PBS为2.5mmol/LKCl、140mmol/LNaCl、1.5mmol/LKH2PO4和6mmol/LNa2HPO4,pH7.4,高压灭菌;TBS为150mmol/LNaCl
和50mmol/LTris,pH7.4;PEG/N