抗胸膜肺炎放线杆菌毒素I、II、III的单克隆抗体的制备.pdf

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13(5):659~663
·研究论文·
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抗胸膜肺炎放线杆菌毒素、和的单克隆抗体的制备*
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黄红亮李冲周锐谢甜甜陈美玲魏洁洪文洲陈焕春**
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(华中农业大学动物医学学院,武汉430070)
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摘要：分别用大肠杆菌()表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌()外毒素(Apx)
、和为抗原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合、克隆与筛选，分别获得能稳定分泌Apx、Apx和Apx单克隆抗体的杂交
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瘤2株(4、16)、3株(14、3F11、16G10)和2株(44、53)。这7株杂交瘤细胞的染色体数分别为87(81~94)、84(81~88)、90(85~94)、87
(80~94)、82(79~85)、93(88~99)和85(82~87)，其腹水ELISA效价分别为100210、10029、100210、10027、100214、100214和
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100212。间接ELISA和Westernblot分析结果证明，所有单克隆抗体均具有与相应天然毒素的反应活性，且特异性良好。
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关键词：胸膜肺炎放线杆菌；Apx；Apx；Apx；单克隆抗体
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GenerationandCharacterizationoftheMonoclonalAntibodiesAgainst
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Apx,ApxandApxof
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HUANGHong-LiangLIChongZHOURuiXIETian-TianCHENMei-Ling
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WEIJieHONGWen-ZhouCHENHuan-Chun**
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SevenhybridomaclonesweregeneratedbyfusionoftheSP2/0myelomacellsandthesplenocytesobtainedfromBalb/c
miceimmunizedbytherecombinantApx,ApxandApxof(APP).Amongthe7hybridoma
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clones,2ofthem(4and16)couldsecretmonoclonalantibodiesagainstApxI,3ofthem(3F11，16G10and14)againstApxandthe
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rest2(44and53)againstApx.Theirchromosomenumberswere81~94,81~88,85~94,80~94,79~85,88~99and82~87,respec-
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tively.TheELISAtitersoftheascitefluidsinducedbythe7hybridomaswere100210,10029,100210,10027,100214,100214and
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100212,respectively.IndirectELISAandWesternblottinganalysesindicatedthatallthe7strainsofmonoclonalantibodiescouldre-
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actspecificallywiththecorrespondingApxtoxinisolatedfromtheculturesofdifferentAPPstrains.
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;Apx;Apx;Apx;monoclonalantibody
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胸膜肺炎放线杆菌(转铁蛋白等，其中外毒素是最重要的毒力因子。
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,APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原体。迄今APP可产生4种RTX外毒素，即毒素、、
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为止，人们已发现APP有15个血清型，分别归属于和(Apx、Apx、Apx和Apx)。研究发现，
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2个生物型(Blackall.,2002)，生物型包括血清Apx大小为105kD，具有强溶血活性和强细胞毒
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型1～12和15，生物型包括血清型13和14。各个性；Apx的分子量也为105kD，其溶血活性和细胞
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国家和地区流行的优势血清型不同，不同血清型之毒性相对较弱；Apx大小为120kD，具有强细胞毒
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间，甚至同一血清型的不同菌株之间的毒力均存在性而无溶血活性。每个血清型的APP只产生这3种
差异，致病性强弱也不尽相同，导致该病的诊断于防毒素中的一种或两种(Frey.,1993,Bosse.,
治相当困难。目前人们已发现，与APP毒力相关的2002)。Apx是最近才发现的的一种外毒素，仅有
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因素有外毒素、荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、脲酶、微弱的溶血活性而无细胞毒性，所有15个血清型均

*基金项目：国家自然科学基金(No.30200011)和中