J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立.pdf

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J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立Medical陈国强1。刁富花2鸡J亚群白血病病毒(avianJ，ALV—J)是禽白血病(avianleukosis)病毒众多亚群之一，主要引起以免疫抑制、生长抑制和髓细胞癌变为特点的传染性致骨髓细胞瘤疾病或成髓性白血病(殷震等，1997；saif，2005；崔治中，2001)。被列为鸡群中除马立克氏病病毒(Marek’svirus，MDV)和禽网状内皮组织增殖病病毒(reticu—virus，REV)以外的第3类致肿瘤病毒(Payne等，1991；徐镔蕊等，2002)。有关该病发病率的报道不尽相同，一般在3％～30％，发病鸡通常呈死亡经过。多数感染鸡无特征性临床症状，但延迟性成熟、蛋小、蛋壳薄、产蛋量下降、受精率和孵化率低、慢性消瘦、肉品废弃等，造成较大直接经济损失(Lin等，2000)。肉鸡的髓细胞瘤病，多发生于性成熟前后的肉种鸡(崔治中，20。7)。杜岩等(2000)首次报道从市场上临床健康的商品代肉鸡中分离检出了ALv-J，并先后从山东、河南、宁夏等省分离和鉴定了多株ALV—J，这表明J亚群白血病已在中国鸡群中广泛存在(杨玉莹，2003；Himly等，1998；Qin等，2001)。目前，对于禽白血病的检测和诊断主要依赖于ELISA、琼脂扩散试验等，但琼脂扩散试验敏感性较差，而ELISA诊断试剂盒因纯化抗原不易得到，致使价格昂贵且较难实现商品化，使得该病不能及时做出准确的诊断，从而严重影响该病的流行病学监测和净化，造成重大的经济损失(顾玉芳等，2004；Xu等，2004；胡北侠等，2009)。因此，为了提高ALV检测的准确性和效率，本研究根据各亚型共有的P27基因设计引物可建立ALV的通用检测方法，设计2对引物，建立的套式PCR技术具有敏感性高、特异性强、快速、高效等特点，约ALV的早期诊断和流行病学调查提供一种有效的检测方法。ScienceofRNAHua—rong，WANG摘要：本试验根据GenBank中登录的禽自血病病毒(Al。V)基因组序列，设计合成了2对引物，外部引物的扩增片段大小蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是关键词：禽白血病病毒；逆转录套式PCR；检测ResearchProgressandLiVestockLongnon—coding生物技术中国畜牧兽医2012年第39卷第12期(1．青海省西宁市湟中县土门关乡兽医站，青海西宁811603；2．青海省大通县后子河兽医站，青海大通810105)为478bp，内部引物的扩增片段大小为314bp，建立了适合ALV快速检测的套式PCR方法(nested—PcR)。采用该方法对ALV毒株进行了检测，试验结果表明，能扩增到314bp的条带，禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减pg，第2次扩增的敏感性是1fg，第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点，可用于禽白血病病毒(AI，V)的临床诊断和分子流行病学调查等。中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1671—7236(2012)12leukosissub—diseaseloendotheliosis作者简介：陈国强(1972一)，男，青海人，兽医师，研究方向：兽医Tuo，XUA＆F·60·virusgroup收稿日期：2012临床。onLIXin(CollegeAnimalTechnology，N。rthwestUniversity，Yangling712100，China)RNA(I，ncRNA)isfunctionalsegmentlongerthannucleotides，with1ittlebetranscribedmosteukaryoticgenome．involvedmechanismulatingthetargetingassociatedwithgenomicimprinting，transcriptionregulatlonhumandiseases．Thischaracteristics，classify，molecularmechanismsresearcheffortsmedicallive—stockImcRNAs．Finally，weapplication。fLncRNAsdomesticanimal．words：1。ngcodingRNA；transcriptionalregulation；humandisease；livestockbreeding；function1000060—0404—18Abstract：Long200protein—codingcapacityin