原位PCR和原位杂交检测蛋鸡J亚群禽白血病病毒.pdf

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原位!"#和原位杂交检测蛋鸡$亚群禽白血病病毒

徐镔蕊%"乔素兰%董卫星#B>+CD)B..1BEF;’8G<;AH1
（%中国农业大学动物医学院北京%$$$3!）
（#安徽省农业委员会畜牧局合肥#1$$$%）
（1IJ<;AK<@.;@.;AL*A+’(’HCB;-’/;,’/CMNKI9;@,B;A@<AHFE!66#1MNI）

摘要：根据IB&8O原型株PQRN%$1株HS6"基因的内部序列，和!"#基因的1T端设计一对引物P"UP2。从发生FB
病死蛋用型鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏和输卵管组织中提取总R0I，反转录为+K0I，经QVR扩增得到长度为"!"-S
的IB&8O+K0I特异性探针。探针定位于"#"6W"6$#-S。将病鸡的组织石蜡切片置PC-;<L9=S/.@@原位QVR仪平台
上，以P"UP2为引物进行原位QVR扩增。应用地高辛标记的+K0I探针对原位QVR扩增后切片进行了原位杂交检
测。结果在待检组织肿瘤组织、十二指肠、骨髓中出现明显的阳性信号。睾丸、肺、胰腺、大脑、输卵管、肾脏均检出
散在的阳性信号。这是国内外首次从分子水平证明蛋鸡O亚群禽白血病。
关键词：原位QVR，原位杂交，蛋鸡O亚群禽白血病病毒，+K0I探针
中图分类号：X26文献标识码：I文章编号：$$$%87#$3（#$$!）$"8$"6!8$!

亚群禽白血病病毒属型反转录病毒。自多聚甲醛固定病料，常规石蜡包埋切片，厚
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［］
%33%年Q;CA.%分离出IB&8O原始株PQRN8%$1以的切片贴于涂有多聚赖氨酸防脱片处理的载玻片，
［］
来，这种新的IB&8O就一直是肉鸡的重要病原#，且!"Z烤%#[备用。同时设两组对照，对照组（%）替代
引起肉鸡业的重大损失。它和其它亚群白血病一实验的病料同实验组；阴性样品对照组（#）的组织材
样，可以通过水平和垂直传播。它与其它亚群白血料取自NQD鸡，其购自北京市实验动物研究中心。
病病毒不同的是O亚群禽白血病病毒侵害的靶细胞%&’引物设计和合成
［］
是骨髓细胞1。过去针对O亚群禽白血病的研究主根据\.A];A^中IB&8O原型株PQRN%$1株
［］
要是集中在自然和人工感染的肉鸡上。对于蛋鸡发HS6"编码基因的序列（_!713$），参照N:<,[等7的方
生该病的自然病例则无相关报道。#$$#年徐镔蕊法，在!"#基因的1T端和HS6"编码基因的内部设计
［］
等!通过对临床病例研究发现蛋鸡也可自然感染一对引物P"UP（2表%），引物由5;‘;R;公司合成。
IB&8O并发生该病，造成严重损失。随后我们对根
表%用于()*+$!"#反应的一对引物
据组织病理学诊断为O亚群禽白血病的病鸡，又用
5;-(.%Q/<:./@>@.La’/QVR’aIB&8O
免疫组化和IB&8O的序列分析证实该病。由于蛋鸡
0>+(.’,<L.@.b>.A+.’a,[.S/<:./*/<.A,;,<’A0;:.B.AH,[U-SQ’@<,<’AU-S
自然发生O亚群禽白血病在国内外还是首次报
"T8\\I5\I\\5\IV5II\III\81TcP"#$"#"6W"#22
［］
道"，本研究旨在用原位QVR和原位杂交方法检测
"T8V\IIVVIII\\5IIVIVIV\81T4P2#$"261W"6$#
发病蛋鸡IB&8O核酸，从分子水平证明蛋鸡中存在
O亚群禽白血病。%&,探针的制备
%&,&%试剂：5REd’(R.;H.A,购自EAJ<,/’H.A；IF&、
%材料和方法
R0;@<A、$%&K0I酶、L05Q@，购自5;‘;R;公司。玻
%&%组织材料璃奶回收试剂盒购自北京华绿源生物技术公司。地
病料取自经组织病理学和免疫组化诊断为O亚高辛标记和检测试剂盒购自R’+[.公司。
群禽白血病的病鸡群，这些组织包括肿瘤组织、十二%&,&’总R0I的提取：病料取自46$Z冻存的肿
指肠、睾丸、肺、胰腺、大脑、输卵管、骨髓、肾脏。用瘤、骨髓、肝脏和脾脏，%$$:H于离心管中，剪碎，然

基金项目：国家自然科学基金资助项目（1$12%$21）
作者简介：徐镔蕊（%3""4），女，安徽蚌埠市人，教授，硕士，主要从事动物分子病理学研究，现就职于中国农业大学动物医学院。5.(：678%$8
7#211$7$；98:;<(：=>-/?@<A;)+’:
其他作者：秦玉明%，李宁%

收稿日期：#$$!8$#8$3，修回日期：#$$!8$"8$6
/期徐镔蕊等：