一种荧光探针及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112341448A(43)申请公布日2021.02.09(21)申请号202011154397.1(22)申请日2020.10.26(71)申请人山东师范大学地址250014山东省济南市历下区文化东路88号(72)发明人唐波张志海甘星星刘振华高雯(74)专利代理机构济南圣达知识产权代理有限公司37221代理人王志坤(51)Int.Cl.C07D405/14(2006.01)C09K11/06(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称一种荧光探针及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种靶向检测小分子硫醇的荧光探针及其制备方法与应用，所述荧光探针结构式如下：所述荧光探针能够实现对细胞内多种小分子硫醇实现靶向检测，选择性好，检测灵敏度高。并且所述荧光探针合成方法简单，检测速度快，检测过程中不需要长时间的孵育，具有很强的抗光漂白性能；在检测过程中不需要添加其他化学物质，操作简单，细胞毒性小，有利于细胞内检测，并且检出限低，抗其他分子干扰能力强；操作方法简单，成本低、具有普适性，易于规模化生产。CN112341448ACN112341448A权利要求书1/2页1.一种荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式如下：2.如权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)化合物Cou-1的合成：2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷混合，溶于无水乙腈进行回流反应，等反应结束后，将得到的固体沉淀洗涤、烘干后得到红色固体Cou-1；2)化合物Cou-2的合成：氮气保护条件下，将乙酸钠和乙酸酐混合，将得到的Cou-1和邻二苯甲醛环己烯加入到上述体系中；等反应结束后，产物洗涤、烘干，得到黄绿色固体Cou-2；3)化合物Cou-3的合成：将得到的Cou-2和1,4-苯二酚溶于无水乙腈中，再加入催化剂碳酸钾，先在室温条件下搅拌，再放入50℃油浴锅中反应，产物旋干、分离提纯得到蓝绿色固体Cou-3；4)化合物Cou-4的合成：在0℃条件下，将得到的Cou-3溶于无水二氯甲烷溶剂中，加入5-硝基-2-呋喃酰氯，再加入少量三乙胺溶液，然后移至室温继续反应，待反应结束后，加入水进行猝灭；将得到的反应液旋干，分离提纯得到最后的探针Cou-4。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷的摩尔比是1:1.5，反应时间为22小时，回流反应的温度为85℃，产物用石油醚洗三次抽滤烘干即可。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中化合物Cou-2和邻二苯甲醛环己烯的摩尔比是2:3，在氩气条件下反应4-6小时，优选为5小时，反应温度是60-100℃，优选为80℃，产物用无水乙醚洗三次抽滤烘干即可。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中化合物Cou-3和1,4-苯二酚的摩尔比是1:1，反应时间是4-6小时，优选为5小时，反应温度是40-60℃，优选为50℃，分离提纯的试剂是乙酸乙酯和无水甲醇的混合物。6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中化合物Cou-3和5-硝基-2-呋喃酰氯的摩尔比是1:2.5，反应时间是10-50分钟，优选为30分钟，反应温度是常温，分离提纯的试剂是二氯甲烷和无水甲醇的混合物。7.权利要求1所述的荧光探针在靶向检测细胞内小分子硫醇中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述小分子硫醇包括半胱氨酸、同型半胱氨2CN112341448A权利要求书2/2页酸和谷胱甘肽。3CN112341448A说明书1/7页一种荧光探针及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种靶向检测小分子硫醇的荧光探针及其制备方法与应用。背景技术[0002]公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。[0003]荧光探针自从在上个世纪被发现以来，由于其具有生物相容性好、背景干扰低、可以实时监控以及灵敏度高等优点，已经被广泛运用到检测细胞和活体内各种氨基酸和离子的荧光成像中。[0004]小分子硫醇不仅与蛋白质的合成和细胞代谢等多种生命活动过程息息相关，而且在维持细胞内正常生理功能平衡和抗氧化系统中扮演重要角色。半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)则是三种主要的小分子硫醇；虽然它们在细胞中的含量水平不同，具体功能也不尽相同，但是在维持细胞内正常生理功能平衡等方面都是极其重要。众所周知，细胞的生命活动靠线粒体提供能量，线粒体对细胞内的ATP合成、细胞凋亡等各种