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本发明公开了一种臭氧荧光探针及其制备方法和应用,涉及荧光探针技术领域。本发明荧光探针的制备方法是将4?羟基苯甲醛或3?氯?4?羟基苯甲醛或3,5?二氯?4?羟基苯甲醛与4?溴?1?丁烯在碱性条件下发生亲核取代反应得到醛基中间体;然后再将得到的醛基中间体与丙二腈异佛尔酮反应,得到本发明所述的臭氧荧光探针。本发明的荧光探针具有很高的选择性和灵敏度,可以用于检测臭氧。