一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112362637A(43)申请公布日2021.02.12(21)申请号202011440264.0(22)申请日2020.12.07(71)申请人福建师范大学地址350100福建省福州市福清市龙江街道校园新村一号福建师范大学研发中心(72)发明人范敏卢玉栋尹丽君韩思睿游瑞云(74)专利代理机构福州科扬专利事务所35001代理人李晓芬(51)Int.Cl.G01N21/65(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图2页(54)发明名称一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法(57)摘要本发明开发了一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5‑羟色胺的方法。其技术方案包括：1)利用种子介导法制备AuNRs，2)制备Au@4‑联苯乙炔(EBP)@AuNRs，3)利用蒸发诱导自组装的方法制备Au@EBP@AuNRs阵列，4)制备Au@4‑巯基苯甲腈(MBN)@AgNPs。将N‑乙酰‑L‑半胱氨酸(NLC)和二硫代双琥珀酰亚胺丙酸酯(DSP)分别修饰Au@EBP@AuNRs阵列和Au@MBN@AgNPs，利用这两个分子捕获5‑HT，借助激光拉曼光谱仪收集数据图谱，以Au@EBP@AuNRs阵列和Au@MBN@AgNPs上位于静默区的特征峰信号强度比值实现对血清中5‑HT含量的超灵敏检测，本方法使用范围为5*10‑8M‑10‑3M。CN112362637ACN112362637A权利要求书1/2页1.一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)AuNRs制备：利用种子介导法得AuNRs溶液；2)Au@EBP@AuNRs制备；3)Au@EBP@AuNRs阵列制备；4)Au@MBN@AgNPs制备。5)以NLC修饰Au@EBP@AuNRs阵列，以DSP修饰Au@MBN@AgNPs；将不同浓度的5-羟色胺孵育至以NLC修饰后的Au@EBP@AuNRs阵列上，再以DSP修饰的Au@MBN@AgNPs捕获5-HT，形成三明治结构；借助激光拉曼光谱仪收集数据图谱得到工作曲线，以Au@EBP@AuNRs阵列和Au@MBN@AgNPs上位于静默区的特征峰信号强度比值实现对血清中5-HT含量的超灵敏检测。2.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，所述AuNRs溶液的制备方法如下：在50℃下，将7gCTAB和1.234g油酸钠加入250mL蒸馏水中，搅拌至温度降至30℃，逐一以体积比为18：250：2.1：1.25：0.8加入4mM硝酸银溶液、1mM氯金酸溶液、37％wt盐酸、64mM抗坏血酸溶液和金种子溶液，搅拌10s后，在30℃中静置48h，得AuNRs溶液。3.根据权利要求2所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，Au@EBP@AuNRs溶液的制备方法如下：将浓度为10-3M的EBP以体积比为1：100加入步骤(1)制备的AuNRs中搅拌2h后，离心重悬；随后逐一加入0.02MCTAC、1mMHAuCl4、0.1MAA，搅拌1h得到Au@EBP@AuNRs溶液。4.根据权利要求3所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，Au@EBP@AuNRs阵列的制备方法如下：将经过食人鱼溶液处理后的玻璃片分别放入浓度为20％wt的硅烷偶联剂中浸泡24h，以乙醇清洗数次后自然状态下干燥；将Au@EBP@AuNRs溶液浓缩10-100倍后，取5uL滴至硅烷偶联剂处理后的玻璃板上，放入湿度为95％、温度为30-50℃的环境中自然蒸发，得Au@EBP@AuNRs阵列。5.根据权利要求2所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，Au@MBN@AgNPs的制备方法如下：在强烈搅拌条件下，将浓度为1％wt的Nact以体积比为1：50加入沸腾后的浓度为0.01％wt的氯金酸水溶液中；当溶液再次沸腾后继续加热搅拌15分钟，然后将得到的酒红色AuNPs溶液；纯化后的AuNPs以200：1的体积比为加入浓度为0.1mM的MBN，孵化1h后离心去除多余的MBN，并重悬在蒸馏水中得AuNPs溶液；最后，以体积比为20：1-7：1将AuNPs溶液和浓度为1mM的硝酸银溶液将入320uL浓度为0.01M的抗坏血酸溶液中，搅拌30min，最终获得橘红色Au@MBN@Ag溶液。6.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中5-羟色胺的方法，其特征在于，步骤5)中NLC的浓度为10-3-10-5M，修饰时间为12h；DSP的浓度为10-3M，修饰时间为2h；5-HT的孵育时间为12h。7.根据权利要求2所述的一种基于表面增强拉曼技术检测