蓝铜胜肽的合成方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113150066A(43)申请公布日2021.07.23(21)申请号202110491271.1(22)申请日2021.05.06(71)申请人山东济肽生物科技有限公司地址272000山东省济宁市高新区技术创业服务中心创业园(72)发明人于更立李江涛李开庆卞发财刘聪林志乐(74)专利代理机构济宁汇景知识产权代理事务所(普通合伙)37254代理人苟莎(51)Int.Cl.C07K5/083(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/08(2006.01)C07K1/06(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称蓝铜胜肽的合成方法(57)摘要本发明涉及一种蓝铜胜肽的合成方法，属于生物医药领域，其特征在于，包括如下步骤：采用通过氯乙酰氯与组氨酸反应生成氯乙酰‑L‑组氨酸,然后与N‑羟基琥珀酰亚胺反应得到Mca‑His‑OSu,然后与保护的赖氨酸反应得到Mca‑His‑Lys(TFA)‑OH，然后与氨水反应得到GHK，通过与醋酸铜或硫酸铜或氯化铜反应得到铜肽；本发明既避免了甘氨酸的保护、组氨酸的保护、Boc‑Gly‑OH羧基的活化，同时大幅度地减少了合成步骤，最后通过结晶的方式得到晶体状蓝铜胜肽，不吸潮、具有金属光泽，避免了冻干，可实现工业化生产。CN113150066ACN113150066A权利要求书1/1页1.蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）Mca‑His‑OH的合成搅拌下，向反应容器内依次加入水、四氢呋喃、组氨酸，用氢氧化钠溶液调pH=10，冷阱降温，向料液中滴加氯乙酰氯和四氢呋喃的混合溶液，滴加过程中用氢氧化钠溶液控pH=10,设定温度下反应一定时间，用盐酸调pH=7析出大量固体，搅拌一定时间后过滤，滤饼真空干燥箱干燥，得到Mca‑His‑OH；（2）Mca‑His‑OSu的合成搅拌下，向反应容器内依次加入四氢呋喃、Mca‑His‑OH、N‑羟基琥珀酰亚胺，冷阱降温，然后缓慢滴加二环己基碳二亚胺和四氢呋喃的混合料液，滴完后升至预设温度反应一定时间，过滤，减压浓缩得到固体；（3）Mca‑His‑Lys(TFA)‑OH的合成搅拌下，向反应容器内依次加入水、H‑Lys（TFA)‑OH、碳酸氢钠，向料液中滴加四氢呋喃和Mca‑His‑OSu的混合溶液，滴加完设定温度下反应一定时间，然后在设定温度下减压浓缩，浓缩后的料液用浓盐酸调pH=2,用乙酸乙酯萃取，水相用正丁醇萃取，合并正丁醇相，设定温度下减压浓缩得到固体；（4）H‑Gly‑His‑Lys‑OH的合成搅拌下，向反应容器内加入氨水，外浴降温至5℃以下时，加入Mca‑His‑Lys(TFA)‑OH，加完后升温至设定温度反应一定时间，反应完后减压浓缩，得到蜡状固体，提纯后得白色固体；（5）蓝铜胜肽的合成：搅拌下，向反应容器内依次加入水、H‑Gly‑His‑Lys‑OH,用盐酸调节至设定pH，加入一水醋酸铜或硫酸铜或二水氯化铜搅拌一定时间，缓慢向料液滴加乙醇，加完后缓慢降温至预设温度，保持该料温下搅拌一定时间，过滤，滤饼真空干燥得到产品蓝铜胜肽晶体。2.根据权利要求1所述的蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，所述步骤（2）中，滴加完二环己基碳二亚胺和四氢呋喃的混合料液后，将温度升至10‑15℃进行反应。3.根据权利要求1所述的蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，所述步骤（4）中的提纯过程为：在反应装置中，搅拌下依次加入水、蜡状固体，用盐酸调pH=8，搅拌下向料液中滴加不良溶剂，加完缓慢降温至0℃，并保持0℃搅拌一定时间，过滤，滤饼真空干燥箱干燥，得到H‑Gly‑His‑Lys‑OH。4.根据权利要求3所述的蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，所述步骤（4）中的不良溶剂采用乙腈。5.根据权利要求1所述的蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，所述步骤（5）中用盐酸调pH至7±0.5。6.根据权利要求1所述的蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，所述步骤（5）中，滴加完乙醇后，缓慢降温至10±2℃，并保持料温10±2℃搅拌。2CN113150066A说明书1/6页蓝铜胜肽的合成方法技术领域[0001]本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种蓝铜胜肽的合成方法。背景技术[0002]1973年，美国Dr.LorenPickart博士研究发现一种由三个氨基酸‑甘氨酸，组氨酸，赖氨酸和铜离子组成的小肽即蓝铜胜肽(GHK‑Cu)。这也开启了蓝铜胜肽在除皱、抗衰、修复等美容方面的应用，以其分子量极小、极易吸收、无刺激、无负担、高活性、高效用等优点，成为当前最具逆转肌龄功效的高端成分。[0003]在如今祛皱抗衰被重点关注的时代，蓝铜胜肽作为抗衰美容的新宠，是21世纪最无刺激的抗衰老除皱产品。[00