一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621608A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110914148.6(22)申请日2021.08.10(71)申请人生工生物工程（上海）股份有限公司地址201600上海市松江区香闵路698号(72)发明人赵斯斯薛茜陈辉芦丽亚万军飞(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463代理人张丽(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图3页(54)发明名称一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及方法(57)摘要本申请提供一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及方法，所述菌体裂解液的组成为：4‑5M蛋白质变性剂、100‑500mM氯化钠、2‑3wt％表面活性剂、38‑62mMpH缓冲剂和余量的水；所述蛋白质变性剂包括异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种。本申请主要利用表面活性剂和蛋白质变性剂(异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种)协同作用对菌体细胞进行裂解；通过pH缓冲剂和氯化钠能够较好调节菌体裂解液的pH；该菌体裂解液的组成成分简单，成本低，不含有溶菌酶和RNaseA酶，可在室温下长期稳定保存且对后续实验无影响；使用该菌体裂解液的试剂盒提取质粒DNA的提取效率高，速度快，可以满足多种生物实验需求。CN113621608ACN113621608A权利要求书1/1页1.一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液，其特征在于，所述菌体裂解液的组成为：4‑5M蛋白质变性剂、100‑500mM氯化钠、2‑3wt％表面活性剂、38‑62mMpH缓冲剂和余量的水；所述蛋白质变性剂包括异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种。2.根据权利要求1所述的提取细菌质粒DNA的菌体裂解液，其特征在于，所述表面活性剂包括TritonX‑100和Tween‑20中的至少一种；优选地，所述pH缓冲剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、醋酸和醋酸钠中的至少一种。3.一种提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括菌体裂解液、洗涤液和洗脱液；所述菌体裂解液为权利要求1或2所述的菌体裂解液。4.根据权利要求3所述的提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括洗涤液A和洗涤液B；所述洗涤液A的组成为：0.5‑3M盐酸胍、30‑70wt％异丙醇和余量的水；所述洗涤液B的组成为：40‑80mMTris‑HCl和40‑80wt％乙醇，所述洗涤液B的pH为6.5‑8.5。5.根据权利要求3所述的提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液的组成为：2‑10mMTris‑HCl；所述洗脱液的pH为6.5‑8.5。6.根据权利要求3‑5任一项所述的提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括硅胶膜吸附柱。7.一种提取细菌质粒DNA的方法，其特征在于，采用权利要求3‑6任一项所述的提取细菌质粒DNA的试剂盒提取得到。8.根据权利要求7所述的提取细菌质粒DNA的方法，其特征在于，所述方法包括：将带有质粒的菌株进行扩增培养得到菌液，将所述菌液进行离心分离，收集菌体沉淀物；使用所述菌体裂解液对所述菌体沉淀物进行菌体裂解，得到菌体裂解物；使用所述洗涤液和洗脱液对所述菌体裂解物进行分离纯化处理。9.根据权利要求8所述的提取细菌质粒DNA的方法，其特征在于，所述扩增培养的过程包括：在含有抗生素的LB培养基中接种带有质粒的菌株培养；优选地，所述培养的温度为30‑37℃，时间为12‑16h；优选地，使用所述菌体裂解液对所述菌体沉淀物进行菌体裂解的过程包括：将所述菌体沉淀物和所述菌体裂解液混合均匀，然后静置。10.根据权利要求8或9所述的提取细菌质粒DNA的方法，其特征在于，所述分离纯化处理的过程包括：将所述菌体裂解物转移至硅胶膜吸附柱中，静置后进行离心分离，弃液体，然后加入洗涤液，静置后离心分离，弃液体；再加入洗脱液，静置后离心分离，得到质粒DNA溶液。2CN113621608A说明书1/10页一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种提取细菌质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及方法。背景技术[0002]质粒是染色体外可以自主复制的遗传单位，包括真核生物细胞器和细菌染色体以外的DNA分子。绝大多数的细菌质粒DNA都是双链闭合环状的DNA分子，常带有抗生素抗性基因，例如抗氨苄青霉素抗性和抗氯霉素抗性等。[0003]质粒DNA是一种基因运载工具，广泛的应用于分子生物学研究中，涉及到基因克隆、基因序列分析、基因疫苗和基因编辑等各个领域。从细菌中提取质粒DNA分子是分子生物学实验中最基本的操作。同时质粒DNA分子提取的效率、纯度和质量直接关系到后续各类分子生物学实验的进行，