一种肌红蛋白抗体-酶标记物及其制备与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113311174A(43)申请公布日2021.08.27(21)申请号202110531836.4(22)申请日2021.05.14(71)申请人宁波瑞源生物科技有限公司地址315000浙江省宁波市江北区皇吉浦路288号(72)发明人艾杨洋陈媛张闻(74)专利代理机构宁波高新区成舟远东专利代理事务所(普通合伙)33306代理人高经(51)Int.Cl.G01N33/72(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种肌红蛋白抗体-酶标记物及其制备与应用(57)摘要本发明涉及酶免疫技术领域，具体涉及一种肌红蛋白抗体‑酶标记物及其制备与应用。所述肌红蛋白抗体‑酶标记物，由马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ和巯基修饰的酶标记物交联得到；所述马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ由6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，与肌红蛋白抗体交联制成；所述巯基修饰的酶标记物是以N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代乙酸盐作为交联剂，与碱性磷酸酶交联后经盐酸羟胺活化制成。本发明的肌红蛋白抗体‑酶标记物经过稀释液稀释后用于酶促化学发光免疫检测时，和普通抗体‑酶标记物相比，其本底值低3~5倍，高值信号与低值信号比值高3倍以上。CN113311174ACN113311174A权利要求书1/1页1.一种肌红蛋白抗体‑酶标记物，其特征在于，由马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ和巯基修饰的酶标记物交联得到；所述马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ由6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，与肌红蛋白抗体交联制成；所述巯基修饰的酶标记物是以N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代乙酸盐作为交联剂，与碱性磷酸酶交联后经盐酸羟胺活化制成。2.一种肌红蛋白抗体‑酶标记物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯为交联剂，与肌红蛋白抗体MBⅡ交联反应后纯化，得到马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ；（2）以N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代乙酸盐为交联剂，与碱性磷酸酶交联反应，再经过盐酸羟胺活化，得到巯基修饰的酶标记物；（3）对所述巯基修饰的酶标记物进行巯基活化，得到活化酶标记物；（4）将步骤（3）的活化酶标记物与马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ混合反应后纯化，得到所述的肌红蛋白抗体‑酶标记物。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与肌红蛋白抗体的摩尔比为（10±1）:1。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述交联反应在室温、避光条件下进行2±0.2小时。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代乙酸盐与碱性磷酸酶的摩尔比为（10±1）:1。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述巯基活化的方法为：向所述巯基修饰的酶标记物中加入终浓度为100mM的盐酸羟胺缓冲液，得到混合液M，加入体积为所述混合液M的0.1%的TEA，在室温下避光反应1±0.1小时。7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）的反应在室温下避光进行1±0.1小时后过Superdex200柱，使用0.1M、pH=7.5的PBS缓冲液进行洗脱，收集第一峰的液体，得到所述肌红蛋白抗体‑酶标记物；可选地，收集第一峰的液体后，使用超滤浓缩管将所得液体浓缩至1~3mL。8.配套权利要求1所述肌红蛋白抗体‑酶标记物使用的稀释液，以pH=7.5、0.1M的PBS为基质，以体积比计，加入1%的表面活性剂、0.05%的叠氮钠、0.05%的ProClin300；以重量比计，加入10%的PEG2000、0.5%的酪蛋白钠盐、3%BSA，混合即得。9.权利要求1所述肌红蛋白抗体‑酶标记物在制备肌红蛋白酶促化学发光免疫检测试剂盒中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，以所述肌红蛋白抗体‑酶标记物为基质，用权利要求8所述稀释液按照体积比为1:（200±100）稀释后，用于肌红蛋白抗原的酶促化学发光检测。2CN113311174A说明书1/6页一种肌红蛋白抗体‑酶标记物及其制备与应用技术领域[0001]本发明涉及酶免疫技术领域，具体涉及一种抗体‑酶标记物及其制备与应用。背景技术[0002]在酶促化学发光免疫分析检测中，抗原或抗体酶标记物对免疫分析的灵敏度及特异性具有重要的作用，是酶促化学发光免疫分析检测中的关键试剂。碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，是一种酶促化学发光免疫诊断试剂应用广泛的酶，通过某些技术手段将其与抗体结合，是酶促化学发光免疫诊断试剂开发中非常重要的