一种提取质粒DNA的试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113846088A(43)申请公布日2021.12.28(21)申请号202111047568.5(22)申请日2021.09.07(71)申请人武汉奥科鼎盛生物科技有限公司地址430000湖北省武汉市东湖开发区东信路11号武汉留学生创业园A、F栋3层(72)发明人刘俊张钦蔺佩佩杨宇静罗光宇(74)专利代理机构武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙)42242代理人万畅(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称一种提取质粒DNA的试剂盒及方法(57)摘要本发明一种提取质粒DNA的试剂盒及方法。包括：细菌悬浮液，所述细菌悬浮液包括三羟甲基氨基甲烷及EDTA；细胞裂解液，所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；蛋白沉淀液，所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸；漂洗液，所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷；以及硅羟基磁珠。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明质粒DNA提取试剂盒，采用羟基磁珠进行DNA吸附，同时采用细菌悬浮液、细胞裂解液、蛋白沉淀液进行悬浮、细胞裂解、蛋白沉淀进行吸附前处理，初步去除蛋白质、大分子DNA等杂质，同时将DNA片段产物从组织中释放，在后期配合使用漂洗液进一步去除杂质，提高了DNA的产量与纯度。CN113846088ACN113846088A权利要求书1/2页1.一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，包括：细菌悬浮液，所述细菌悬浮液包括三羟甲基氨基甲烷及EDTA；细胞裂解液，所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；蛋白沉淀液，所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸；漂洗液，所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷；以及硅羟基磁珠；所述硅羟基磁珠的固含量为80mg/ml～120mg/ml。2.根据权利要求1所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液包括下列含量的组分：0.15mol/L～0.25mol/L的NaOH及体积百分比为0.08％～0.12％的十二烷基硫酸钠。3.根据权利要求1所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述细菌悬浮液包括下列含量的组分：40mmol/L～60mmol/L的三羟甲基氨基甲烷及8mmol/L～12mmol/LEDTA。4.根据权利要求1所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述蛋白沉淀液包括下列含量的组分：3.0mol/L～4.5mol的盐酸胍，0.5mol/L～0.8mol/L的醋酸钾及1.5mol/L～2.5mol/L的乙酸。5.根据权利要求1所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液包括下列含量的组分:2.2mol/L～3.0mol/L的盐酸胍，15.0mmol/L～16.5mmol/L的醋酸钾及2.0mol/L～3.0mol/L的三羟甲基氨基甲烷。6.一种提取质粒DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1:去除菌液的上清液后，加入细菌悬浮液；步骤S2:加入细胞裂解液混匀，静置，得到细菌裂解液；步骤S3:往所述细菌裂解液中加入蛋白沉淀液混匀，静置后，去除沉淀后的蛋白质，得到预处理液；步骤S4:往所述预处理液中加入羟基磁珠后进行吸附，去除上清液后得到第一次吸附产物；步骤S5:将所述第一次吸附产物进行洗涤，得到洗涤产物；步骤S6:将DNA从羟基磁珠上脱附，然后去除洗涤产物中的羟基磁珠，得到纯化产品；所述细菌悬浮液三羟甲基氨基甲烷及EDTA；所述细胞裂解液包括强碱及十二烷基硫酸钠；所述蛋白沉淀液包括盐酸胍、醋酸钾及乙酸。7.根据权利要求6所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述步骤S5包括以下步骤：步骤S5‑1:将所述第一次吸附产物加入漂洗液进行磁珠吸附，去除上清液，得到第一次洗涤产物，步骤S5‑2：将所述第一次洗涤产物加入乙醇溶液后进行磁珠吸附，去除上清液，得到所述洗涤产物；所述漂洗液包括盐酸胍、醋酸钾及三羟甲基氨基甲烷。8.根据权利要求6或7所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述步骤S6中，往所述洗涤产物中加入灭菌水后，将DNA从所述羟基磁珠上脱附。9.根据权利要求6或7所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述步骤S1～所述步骤2CN113846088A权利要求书2/2页S3中，加入所述菌液、所述细菌悬浮液、所述细胞裂解液以及所述蛋白沉淀液的体积比为：(3.5～4.5)：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。10.根据权利要求7所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于，所述硅羟基磁珠的体积与所述预处理液比为1:(20～80)。3CN113846088A说明书1/8页一种提取质粒DNA的试剂盒及方法