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本发明提供了一种λ噬菌体DNA提取试剂盒及提取方法,属于核酸提取分离技术领域,所述试剂盒包括以下组分:DNaseI液、RNaseA液、沉淀液、第一裂解缓冲液、第二裂解缓冲液、杂质沉淀液、DNA结合液、漂洗缓冲液和DNA洗脱液;所述第一裂解缓冲液以水为溶剂,包括以下浓度的组分:50~100mMTris?HCl,50~100mMNaCl和25~50mMEDTA;所述第二裂解缓冲液为10%~20%的SDS水溶液。利用本发明提供的DNA提取试剂盒和提取方法获得的λ噬菌体DNA纯度好,浓度高,无宿主DNA和RNA污染。