一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113699192A(43)申请公布日2021.11.26(21)申请号202110964825.5(22)申请日2021.08.23(71)申请人南开大学地址300071天津市南开区卫津路94号(72)发明人王春国李慧陈成彬(74)专利代理机构天津市杰盈专利代理有限公司12207代理人朱红星(51)Int.Cl.C12P13/00(2006.01)C12N9/24(2006.01)C07C331/20(2006.01)C12R1/84(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法(57)摘要本发明涉及一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法。包括以下步骤：青花菜胁迫处理；青花菜组织材料破碎及酶解；青花菜酶解产物中萝卜硫素的萃取；旋转蒸发获得萝卜硫素粗提取物浸膏；制备液相色谱法获得高纯度萝卜硫素。与现有技术相比本发明充分利用青花菜受到逆境胁迫会激发体内硫代葡萄糖苷‑黑芥子酶系统，产生萝卜硫素等硫苷水解产物的特征，通过胁迫诱导及施加高活性外源黑芥子酶的方式大幅度提高原材料中萝卜硫素的含量，并采用单一有机溶剂循环使用，实现对原材料中萝卜硫素的提取。提取方法简单、效率高、环境友好，可直接用于工业化生产。提取的萝卜硫素纯度达90%‑98%，可被广泛用于药品、食品、化妆品等各个领域，具有极高的经济价值。CN113699192ACN113699192A权利要求书1/1页1.一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）青花菜材料胁迫处理：收集用于提取萝卜硫素的青花菜的新鲜地上部分进行盐胁迫和/或机械创伤胁迫和/或紫外照射胁迫，胁迫处理4‑6小时;（2）青花菜组织材料破碎及酶解：将经过胁迫处理的青花菜新鲜地上部分材料采用搅拌机或榨汁机打碎，形成组织匀浆，将匀浆液收集于适当容器中加入2‑5倍体积的灭菌蒸馏水，同时按照100份加水组织匀浆液：1份黑芥子酶酵母提取液：0.2份维生素C的比例加入黑芥子酵母提取液及维生素C，混匀，35℃‑37℃酶解处理6‑12小时，期间不断搅拌，酶解结束后，利用过滤网或筛对酶解处理液进行过滤处理或利用离心机对酶解液进行离心处理，除去酶解处理液中的植物组织碎片，获得澄清的酶解处理液；所述的黑芥子酶酵母提取液指的是表达青花菜黑芥子酶基因的毕赤酵母工程菌经过培养形成的产物；（3）青花菜组织材料酶解产物中萝卜硫素的萃取：将经过过滤或离心处理获得的酶解处理液中加入二氯甲烷进行萃取，萃取4次，每次萃取20min,合并萃取液，在萃取液中加入氯化钠、无水硫酸钠、无水碳酸钙，震荡处理10‑30min，离心或过滤，收集上清；所述的氯化钠、无水硫酸钠、无水碳酸钙的质量比例为1：0.78：0.5；（4）旋转蒸发获得萝卜硫素粗提取物浸膏：将萃取液置于旋转蒸发瓶中，35℃‑40℃旋转蒸发，获得萝卜硫素粗提取物浸膏，回收经冷凝处理收集的二氯甲烷，将其循环用于酶解液的萃取；（5）制备液相色谱法获得高纯度萝卜硫素：将萝卜硫素提取物浸膏溶于甲醇或乙腈中，按常规方法，采用制备型液相色谱获得高纯度萝卜硫素。2.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤（1）中青花菜新鲜地上部分指的是地上部分的叶、花球、茎、种子、种荚和花蕾中的一种或几种的组合。3.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤（1）中对青花菜新鲜地上部分进行盐胁迫处理的盐浓度为0.4%‑1%的NaCl溶液，处理方式为将NaCl溶液喷洒在处理材料的表面，处理时间为4‑6小时；对青花菜新鲜地上部分进行机械创伤胁迫指的是通过机械切割、挤压、剪切方式对青花菜的新鲜地上部分进行有限强度的处理，确保处理的材料不会立刻失去活性，处理时间4‑6小时。4.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤（2）中黑芥子酶酵母提取液为表达青花菜黑芥子酶基因的毕赤酵母工程菌经过培养形成的产物，其活性是通过芥菜或青花菜种子或幼苗中制备的黑芥子酶粗提取物活性的上百倍。5.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤（3）中将经过过滤或离心处理获得的酶解处理液中加入二氯甲烷进行萃取，萃取温度为20℃‑30℃。6.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法，其特征在于：所述步骤（4）中回收经冷凝处理收集的二氯甲烷，回收效率在90%以上，回收后的二氯甲烷可循环用于酶解液的萃取。7.权利要求1所述的一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法在制备不同纯度萝卜硫素中的应用。2CN113699192A说明书1/7页一种从青花菜中提取萝卜硫素的方法技术领域[0001]本发明属于植物天然产物提取技