一种蛋白纳米酶及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113797224A(43)申请公布日2021.12.17(21)申请号202111225862.0A61P17/02(2006.01)(22)申请日2021.10.21A61P17/16(2006.01)A61P17/18(2006.01)(71)申请人重庆医科大学A61P29/00(2006.01)地址400016重庆市渝中区医学院路1号(72)发明人彭咏波谢丽雲王军懿于超曾雅君杨丽梅张雅真彭琪瑶樊鑫垚陈美姿罗爱民杨腾(74)专利代理机构广州蓝晟专利代理事务所(普通合伙)44452代理人欧阳凯(51)Int.Cl.A61K33/04(2006.01)A61K9/51(2006.01)A61K47/64(2017.01)A61P7/04(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图5页(54)发明名称一种蛋白纳米酶及其制备方法和用途(57)摘要本发明属于生物医药技术领域，公开了一种蛋白纳米酶及其制备方法和用途。该制备方法是将硒化合物和鱼精蛋白加入经过二硫键还原剂处理后的蛋白内部空间结构打开的富含巯基群的还原型白蛋白溶液中，硒化合物在蛋白内部原位还原成单质纳米硒，集成蛋白内部N、S、O活性基团和过量巯基群，以及单质纳米硒和鱼精蛋白的碱性氨基酸诱导组装，获得蛋白硒纳米酶。实验表明，跟无机纳米硒比较，这种白蛋白纳米酶稳定性好，安全性更高，可以很好的用于制备抗皮肤衰老护肤品、防治溃疡药物、镇痛药物、消炎药物、止血药物、创面修复药物或防治射线辐射损伤药物。CN113797224ACN113797224A权利要求书1/1页1.一种蛋白硒纳米酶的制备方法，其特征在于：将硒化合物和鱼精蛋白加入经过二硫键还原剂处理后的蛋白内部空间结构打开的富含巯基群的还原型白蛋白溶液中，硒化合物在蛋白内部原位还原成单质纳米硒，集成蛋白内部N、S、O活性基团和过量巯基群，以及单质纳米硒和鱼精蛋白的碱性氨基酸诱导组装，获得蛋白硒纳米酶。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述二硫键还原剂为还原型谷胱甘肽、半胱氨酸、二硫苏糖醇、β‑巯基乙醇或三(2‑羧乙基)膦；所述白蛋白为含二硫键的蛋白，包括天然来源或工程化重组得到的人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、驴血清白蛋白、转铁蛋白中的一种以上；所述硒化合物为二氧化硒、亚硒酸盐、硒酸盐或其硒的硫代衍生物。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤：A、将鱼精蛋白溶于水，再加入硒化合物，制备得到硒化合物和鱼精蛋白混合溶液；B、将白蛋白加入二硫键还原剂溶液中，置入密封或除氧的瓶中，搅拌均匀，在33～60℃反应10～300min，得到蛋白内部空间结构打开的富含巯基群的还原型白蛋白溶液；C、向步骤B所得白蛋白溶液中加入步骤A所得混合溶液，得到白蛋白终浓度为0.01～100mg/mL的反应液，4～24℃密封条件下进行搅拌反应1～12小时，再经过透析，得到蛋白硒纳米酶溶液。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤A所述鱼精蛋白在混合溶液中质量浓度为0.1～10％，所述硒化合物在混合溶液中浓度为1～10mM。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤B所述二硫键还原剂溶液是指二硫键还原剂的磷酸盐或生理盐水溶液，pH值为5.0～9.0，其浓度为0.01～60mM；所述白蛋白在还原型白蛋白溶液中的浓度为0.01～200mg/mL。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述二硫键还原剂溶液的浓度为0.1～40mM；所述白蛋白在还原型白蛋白溶液中的浓度为0.5～100mg/mL。7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤B所述反应是在37～50℃条件下反应30～200min。8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤C所述透析是将溶液放入透析袋，并于0～30℃的磷酸缓冲溶液或生理盐水中透析除去多余的二硫键还原剂和硒化合物及其副产物；透析分子截留不低于1000；所述白蛋白终浓度为30～60mg/mL。9.一种由权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到的蛋白硒纳米酶。10.根据权利要求9所述的蛋白硒纳米酶在制备抗皮肤衰老护肤品、防治溃疡药物、镇痛药物、消炎药物、止血药物、创面修复药物或防治射线辐射损伤药物中的用途。2CN113797224A说明书1/12页一种蛋白纳米酶及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种蛋白纳米酶及其制备方法和在制备抗皮肤衰老护肤品、防治溃疡药物、镇痛药物、消炎药物、止血药物、创面修复药物或防治射线辐射损伤药物中的用途。背景技术[0002]近来，由于纳米技术的不断发展和产业成熟，研究发现新型人工酶—纳米酶具有开发成本低、易于生物化学修饰