新型α-1抗胰蛋白酶变体及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103827141103827141A(43)申请公布日2014.05.28(21)申请号201280044912.8(51)Int.Cl.(22)申请日2012.08.13C07K14/47(2006.01)C12N15/15(2006.01)(30)优先权数据C12N15/63(2006.01)10-2011-00928192011.09.15KRA61K38/17(2006.01)10-2012-00589982012.06.01KR(85)PCT国际申请进入国家阶段日2014.03.14(86)PCT国际申请的申请数据PCT/KR2012/0064412012.08.13(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/039295KO2013.03.21(71)申请人阿特根公司地址韩国大田广域市(72)发明人朴淳宰郑惠信李尚美金知宣(74)专利代理机构广州三环专利代理有限公司44202代理人温旭郝传鑫权利要求书1页权利要求书1页说明书43页说明书43页序列表14页序列表14页附图9页附图9页(54)发明名称新型α-1抗胰蛋白酶变体及其制备方法和用途(57)摘要本发明提供一种新型α-1抗胰蛋白酶变体及其制备方法和用途。根据本发明，血液半衰期（t1/2）和血药浓度-时间曲线下面积（AUC）通过N-末端第1位至第25位之间的氨基酸突变以在动物细胞中添加N-糖基化位点而得到显著增加，因此，所述α-1抗胰蛋白酶变体具有非常好的体内稳定性并且保留了对弹性蛋白酶活性的抑制作用。因此，本发明的α-1抗胰蛋白酶变体可用于预防或治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏。CN103827141ACN1038274ACN103827141A权利要求书1/1页1.一种α-1抗胰蛋白酶变体，该变体通过对α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸进行取代以添加糖基化位点来制备。2.如权利要求1所述的α-1抗胰蛋白酶变体，其中，所述α-1抗胰蛋白酶变体具有添加于其上的1个至3个糖基化位点。3.如权利要求1所述的α-1抗胰蛋白酶变体，其中，所述特定位点存在于所述N-末端的第3位至第13位之间。4.如权利要求1所述的α-1抗胰蛋白酶变体，其中，所述特定位点存在于所述N-末端的第9位或第12位。5.如权利要求1所述的α-1抗胰蛋白酶变体，其中，所述特定位点存在于第4位和第9位、第4位和第12位或第9位和第12位。6.一种制备α-1抗胰蛋白酶变体的方法，所述方法包括：a）取代α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸以添加糖基化位点；b）在培养基中培养用其上添加有糖基化位点的α-1抗胰蛋白酶表达载体转化的细胞；c）通过所述细胞表达α-1抗胰蛋白酶变体蛋白；以及d）纯化并回收表达的α-1抗胰蛋白酶变体蛋白。7.一种用于预防或治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏的组合物，所述组合物包含作为活性成分的α-1抗胰蛋白酶变体，其中，所述α-1抗胰蛋白酶变体通过取代α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸以添加糖基化位点来制备。8.如权利要求7所述的组合物，其中，所述α-1抗胰蛋白酶缺乏是慢性阻塞性肺病或肝硬化。9.一种预防或治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏的方法，所述方法包括：将治疗有效量的α-1抗胰蛋白酶变体给药于患者，其中，所述α-1抗胰蛋白酶变体通过取代α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸以添加糖基化位点来制备。10.一种具有增加的体内半衰期的α-1抗胰蛋白酶变体融合物，其中，所述融合物通过连接两个α-1抗胰蛋白酶变体来制备，每个α-1抗胰蛋白酶变体通过取代α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸以添加糖基化位点来制备。11.一种包含具有提高的体内半衰期的异质蛋白的α-1抗胰蛋白酶变体融合物，其中，所述融合物通过将α-1抗胰蛋白酶变体连接至所述异质蛋白来制备，并且，所述α-1抗胰蛋白酶变体通过取代α-1抗胰蛋白酶的N-末端的第1位至第25位之间的特定位点上的氨基酸以添加糖基化位点来制备。12.如权利要求11所述的α-1抗胰蛋白酶变体融合物，其中，所述α-1抗胰蛋白酶变体在第357位具有氨基酸脯氨酸，该脯氨酸进一步被天冬酰胺取代，所述第357位为P2位置。2CN103827141A说明书1/43页新型α-1抗胰蛋白酶变体及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及新型α-1抗胰蛋白酶变体及其制备方法和用途。背景技术[0002]α-1抗胰蛋白酶是一种由394个氨基酸残基构成的蛋白质，其分子量为约50,000道尔顿（Da），并且其存在于哺乳动物的血液中。α-1抗胰蛋