生物分离与纯化.ppt

第十三章生物物质的分离与纯化
补充内容（一）发酵醪的特性一般可归纳为：

1、发酵醪大部分是水，一般含量达90%-99%.

2、发酵醪中发酵产物浓度较低，尽管由于菌种、原料、工艺条件不同，发酵产物于发酵醪中浓度的高低也有差异，但总的来说发酵醪中发酵产物浓度都是比较低的，除了酒精、柠檬酸、葡萄糖酸等发酵产物浓度在10%以上外，其余的都在10%以下，而抗生素的浓度更低，一般在1%以下。

3、发酵醪中的悬浮固体物主要含有菌体和蛋白质胶状物。由于发酵醪中存在一定数量的菌体和蛋白质胶体物质，不仅使发酵醪粘度增加，不利于过滤，而且增加提取和精制后工序的操作困难，在浓缩过程中变得更粘稠，同时容易产生泡沫。采用溶媒萃取法提炼时，蛋白质的存在夺产生乳化，使溶媒相和水相分层困难；采用离子交换法提炼时，蛋白质的存在也会增加树脂的吸附量，加重树脂的负担。4、发酵醪的培养基残留成分中还含有无机盐类，非蛋白质大分子其降解产物对提取和精制均有一定的影响。
5、发酵醪中除了发酵产物外，常有其他少量的代谢产物。发酵过程中除了主代谢产物外，尚伴有一些其他的副代谢产物。这些少量的副产物，有时其结构特性与发酵主产物极为近似，这就会给分离提纯操作带来困难。
6、发酵醪中还含有色素、热原质、毒性物质等有机杂质。尽管它们的确切组成还不十分明了，但它们对提炼影响相当大。为了保证发酵产品的质量和卫生标准，应通过预处理将色素、热原质、毒性物质等有机杂质先除去。发酵成熟醪中常含有各种样的杂质，而所需要的发酵产物则含量很少。因此，要获得纯净的发酵产物，它的提取与精制过程便成为一个复杂而必不可少的工艺过程。提取和精制的目的在于从发酵液中制取高纯度的、合符质量标准要求的发酵成品。
尽管由于菌种、发酵醪的特征及发酵工艺的不同，发酵产物可以多种多样，但从工业发酵范畴来看，从发酵醪中获得产物大致可分为三类：
菌体
主要以菌体细胞作为发酵产品，如单细胞蛋白、面包酵母、饲料酶母等。此外就是从菌体细胞中提取有用的发酵产物，如由酵母细胞提取辅酶A、核糖核酸等产品。有的抗生素主要存在于菌丝体中，如灰黄霉素产生菌在发酵过程中所产生的灰黄霉素主要在菌丝中，因此，也要从菌丝体中进行提取。

酶
发酵产物为酶制剂，包括胞外酶和胞内酶。如α-淀粉酶、β-淀粉酶、异淀粉酶、葡萄糖异构酶、葡萄糖氧化酶、右旋糖酐酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、转化酶、蜜二糖酶、柚苷酶、花青素酶、脂肪酶、凝乳酶、氨基酰化酶、天冬氨酸酶、青霉素酰胺酶、磷酸二酰酶、天冬酰胺酶等，均在工业上和医药上发挥作用。有机溶剂发酵产物包括酒精、丙酮、丁醇等。

核苷酸类物质发酵产物包括肌苷、肌苷酸以及鸟苷酸等。5`-肌苷酸和5`-鸟苷酸均为呈味核苷酸，核酸的微生物包括辅酶A、ATP、辅酶I等均为重要的医药品。

抗生素发酵产物包括青霉素、链霉素、四环素、土霉素、金霉素、庆大霉素、新霉素、红霉素及利福霉素等。

多糖发酵产物包括右旋糖酐及多糖B-1459等。多糖是医药和工业上重要粘性物质来源之一，右旋糖酐经过部分水解后供代血浆用。多糖B-1459是水溶性、高分子量的胞外异多糖。

维生素发酵产物有核黄素、维生素C和维生素B12.

甾体氧化的产物为甾体激素，是重要的品。如醋酸可的松、氢化可的松、醋酸泼尼松、氢化泼尼松等促皮质激素及肾上腺皮质激素制剂、黄体酮、甲孕酮（安宫黄体酮）等性激素、炔诺酮等避孕药。问题生化生产过程的最后一个环节是把目标产物从培养液或反应液中分离提取出来。多数生化产品在生产过程中需经微生物发酵、酶反应过程或动植物细胞大量培养，并通过包括产物回收、粗分离、纯化及精制等处理后，才能符合一定的质量标准。在生物产品生产过程中一般将微生物发酵、酶反应过程或动植物细胞大量培养称为“上游过程”，而与之相应的产物回收、粗分离、纯化及加工等后续过程就称之为“下游过程”，或称之为生化分离和纯化过程。众所周知，要使生物技术走向产业化，必须要上下游过程兼容、协调、以使全过程能优化进行。

鉴于生化产品具有如下特点：目的产物在初始物料中的含量低；含目的产物的初始物料组成复杂，除了产物外，还含有大量的细胞、代谢物、残留培养基、无机盐等；生物活性物质的稳定性差，对PH、温度、金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等十分敏感，易失活、变性；生化产品种类繁多，包括了大、中、小分子量的结构和性质复杂又各异的生物活性物质；生化产品的应用面广，许多产品用作医药、食品、试剂等，对含量和纯度要求高等。因此，应用于生化产品的后处理过程中的分离纯化技术必须满足以下一些要求：条件温和，特别对具有生物活性的物质，在后处理过程中必须保持其生物活性；

分离纯化技术的选择性好、专一性强，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，以达到较高的分离纯化倍数；

目的产物的量和活性具有较高