生物药物的分离纯化..ppt

主要讲授内容5.糖类药物的分离纯化方法
6.脂类药物的分离纯化方法
7.氨基酸类药物的分离纯化方法1.1生物药物原料的选择1.2原料的预处理与保存原料的保存方法主要有：①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。2.生物药物的提取生物组织与细胞的破碎常用的破碎方法有5种：C.反复冻融法，该方法设备简便，活性保持好，但用时较长。
D.超声波振荡破碎法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。
E.自溶法或酶解法，用得较少。生物组织活性物质的提取要在细胞破碎后立即进行。
提取过程中
（1）要根据活性物质的性质，选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂(如氯仿、丙酮等)。（2）考虑提取溶剂的用量（料液比）及提取次数、提取时间。
（3）注意提取的温度、pH、变性剂等因素。这样才可以保证活性物质提取充分而且不变性。3.蛋白质类药物的分离纯化方法(1)沉淀法(2)按分子大小分离的方法(3)按分子所带电荷进行分离的方法（4）亲和层析法4.核酸类药物的分离纯化方法5．糖类药物的分离纯化方法提取方法(2)分离方法乙醇沉淀法是从提取液中沉淀多糖的最简易方法，也适用于分级分离。用4～5倍体积的乙醇可以使任何结缔组织中的粘多糖完全沉淀。
季铵化合物也可用于沉淀粘多糖,其原理是粘多糖的聚阴离子能与某些阳离子表面活性剂结合成不溶于水的盐，如十六烷基三甲基铵(CTA)等。离子交换层析法：粘多糖的聚阴离子能够很好地被阴离子交换剂吸附和分离，如Dowex-I-X2离子交换树脂、DEAE-离子交换纤维素*等。洗脱可用NaCl溶液进行梯度洗脱。
注意从粗多糖中除去蛋白常用的方法有：Sevag法、三氯乙酸法和蛋白酶解法。
*二乙氨基乙基纤维素6.脂类药物的分离纯化方法(2)纯化方法
沉淀法：由于不同脂质在丙酮中溶解度不同，故常用它进行沉淀。
吸附层析法：常用吸附剂有硅胶、氧化铝等。它是通过极性和离子键力等把各种化合物结合到固体吸附剂上。一般是采用极性逐渐增大的洗脱液来进行，非极性组分先流出，极性组分后流出。离子交换层析法：脂质分子的存在有非解离和酸式解离两种状态。根据它们在一定pH条件下的解离情况，选择适当的离子交换剂可将它们提纯。如TEAE-纤维素*对分离脂肪酸和胆汁酸等特别有效。
三乙氨基乙基纤维素7.氨基酸类药物的分离纯化方法蛋白质水解法：水解法有酸水解、碱水解和酶水解三种。用盐酸水解为常用方法，其优点是水解迅速、完全，产物全部是L-型氨基酸，缺点是色氨酸全部被破坏，丝氨酸等部分被破坏。碱水解法易产生消旋作用，较少应用。酶水解法水解不够完全。发酵法：发酵法主要是选育特异产生某种氨基酸的菌株，经过发酵后，从培养液中提纯氨基酸。化学合成与酶促合成法：化学合成法一般得到的是D/L-型氨基酸，需要对这些异构体拆分；酶促合成法也是酶工程在医药工业上应用的一个内容，优点是技术工艺简单，转化率高，副产物少和易提纯等。氨基酸的分离方法：
沉淀法
吸附法
离子交换法沉淀法：根据形成沉淀的原理不同分为两种：一种是依据不同氨基酸在水中或其他溶剂中的溶解度差异进行沉淀分离。另一是用特殊试剂沉淀某种氨基酸，如用邻二甲苯-4-磺酸与亮氨酸形成不溶性盐沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游离出来。吸附法：这是利用吸附剂根据氨基酸吸附力的差异进行氨基酸分离的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分离就是利用活性炭对其吸附的原理。离子交换法：氨基酸是两性电解质，在一定pH条件下，不同氨基酸带电性质及解离状态是不相同的，因此在离子交换剂上被吸附的强度不同。常用的离子交换剂为强酸型阳离子交换树脂，洗脱主要用pH梯度洗脱。高效分离纯化系统的采用（1）固相化金属亲和层析(IMAC)（2）超扩散层析这种结构可使层析操作在高流速下进行而保证高上样量和高分辨率，并且无反压产生。Hyper-D具有化学隋性。可用酸碱进行再生和杀菌，可用于纯化免疫球蛋白、白蛋白、激素、酶、细胞培养或发酵产生的蛋白质。适用于实验室小试直至工业化大生产。(3)灌注层析它所采用的POROUS介质以苯乙烯基二乙烯基苯的聚合物构成，为双模式孔结构，在介质上有80～150nm的扩散孔和600～800nm的贯穿孔。它允许液体对流到分离介质的内表面，从而大大加快了分离速度。灌注层析系统可有效、快速地纯化各种蛋白质、多肽、核酸等生物大分子。它比传统柱快l0～100倍，分析一个样品只需要0.5～3min。日本制药公司Otsuka使用博大生物技术公司的POROS-50介质和大生产规模系统(autopilot)生产单克隆抗体，从32