一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113637806A(43)申请公布日2021.11.12(21)申请号202111128236.X(22)申请日2021.09.26(71)申请人上海海关动植物与食品检验检疫技术中心地址200135上海市浦东新区民生路1208号(72)发明人薛俊欣(74)专利代理机构上海领誉知识产权代理有限公司31383代理人车超平(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图6页(54)发明名称一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒及其检测方法，本发明属于生物检测技术领域，所述试剂盒包括：crRNA、T7转录酶、NTP、探针、Cas13a和核酸扩增试剂；所述核酸扩增试剂包括引物对，所述引物对选自如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核酸序列，和/或如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核酸序列；所述crRNA选自如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核酸序列。该试剂盒可用于非诊断治疗目的的口蹄疫病毒检测，该方法具有极高的特异性和灵敏度，为基于恒温扩增的重大动物疫病的检测试剂的制备和生产提供参考。CN113637806ACN113637806A权利要求书1/1页1.一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：crRNA、T7转录酶、NTP、探针、Cas13a和核酸扩增试剂；所述核酸扩增试剂包括引物对，所述引物对选自如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核酸序列，和/或如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核酸序列；所述crRNA选自如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核酸序列。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增试剂还包括RPA或RAA的扩增试剂。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述crRNA的浓度为10μM，所述T7转录酶的浓度为1mg/mL，所述NTP的浓度为100mM，所述探针的浓度为10μM，所述Cas13a的浓度为1mg/mL。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：反应缓冲液和水。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：crRNA1μL、T7转录酶1.5μL、NTP4μL、探针2.5μL、Cas13a0.5μL、核酸扩增产物2.5μL、反应缓冲液2.5μL和水11μL；所述核酸扩增产物通过所述核酸扩增试剂扩增得到。6.根据权利要求1至5任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过所述核酸扩增试剂得到核酸扩增产物；S2、将所述核酸扩增产物与crRNA、T7转录酶、NTP、探针和Cas13a按比例混合得到反应溶液；S3、所述反应溶液进行反应并收集荧光。7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤S1中所述通过所述核酸扩增试剂得到核酸扩增产物包括：使用RPA或RAA的系统进行扩增得到所述核酸扩增产物；和/或通过苯酚氯仿法纯化得到所述核酸扩增产物。8.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤S2中所述反应溶液的组成为：crRNA1μL、T7转录酶1.5μL、NTP4μL、探针2.5μL、Cas13a0.5μL、所述核酸扩增产物2.5μL、反应缓冲液2.5μL和水11μL。9.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤S3中所述反应溶液进行反应并收集荧光包括：所述进行反应的温度为39℃；和/或所述收集荧光的时间为30min～120min。10.根据权利要求1至5任一项所述的试剂盒在非诊断治疗目的的口蹄疫病毒检测中的应用。2CN113637806A说明书1/7页一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于口蹄疫病毒检测的试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot‑and‑mouthdiseasevirus，FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物的急性、恶性、高接触性传染病，一旦爆发，必须扑杀感染及接触感染的动物。口蹄疫被世界动物卫生组织列为法定报告疾病，被我国列为一类动物疫病之首，不仅会造成巨大的直接经济损失，而且严重危害畜牧业的健康发展以及相关产品的对外贸易，对国家的政治、经济具有深远的影响。[0003]口蹄疫有7种血清型和65个以上的血清亚型，血清型之间无交叉免疫现象，因而难以控制。口蹄疫主要包括A型、O型、C型、亚洲I型、南非1/2/3型(SAT1/2/3)共7种血清型。由于养殖动物高度密集，患病动物呼出、排泄大量的病