一种鸽源新城疫病毒重组疫苗株及其构建方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113736800A(43)申请公布日2021.12.03(21)申请号202111172150.7C12N15/85(2006.01)(22)申请日2021.10.08A61K39/17(2006.01)A61P31/14(2006.01)(83)生物保藏信息C12R1/93(2006.01)CGMCCNo.219002021.07.09(71)申请人中国动物卫生与流行病学中心地址266000山东省青岛市市北区南京路369号(72)发明人于晓慧王静静刘华雷舒波李峥李阳蒋文明(74)专利代理机构北京识然知识产权代理事务所(普通合伙)11975代理人曾庆国(51)Int.Cl.C12N15/45(2006.01)权利要求书1页说明书13页C12N7/04(2006.01)序列表16页附图2页(54)发明名称一种鸽源新城疫病毒重组疫苗株及其构建方法和应用(57)摘要本发明提供一种鸽源新城疫病毒重组疫苗株，其中用于构建鸽源新城疫病毒重组疫苗株的过程中使用的基因片段包含了毒性致弱的鸽源新城疫病毒的囊膜糖蛋白F蛋白基因和HN蛋白基因。其中一种具体的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株的保藏编号为CGMCCNo.21900。本发明提供的鸽源新城疫病毒重组疫苗株在鸡胚中具有高生长滴度和低致病力的生物学特性，遗传稳定，对鸽源新城病毒具有良好的免疫保护效果，并能有效抑制排毒，能够用于防控目前流行的鸽源新城疫病毒，填补了我国缺少鸽新城疫防控专用疫苗产品的空白。CN113736800ACN113736800A权利要求书1/1页1.一种用于构建鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株的基因片段，其特征在于，所述的基因片段包含了毒性致弱的鸽源新城疫病毒的囊膜糖蛋白F蛋白基因和HN蛋白基因；所述的毒性致弱的鸽源新城疫病毒的囊膜糖蛋白F蛋白基因，是将氨基酸序列为SEQIDNO:1的F基因的位点112R‑R‑Q‑K‑R‑F117突变为112G‑R‑Q‑G‑R‑L117。2.如权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述的HN蛋白基因，其氨基酸序列为SEQIDNO:2。3.如权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述的HN蛋白基因，其氨基酸序列为SEQIDNO:3。4.如权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述的基因片段的核苷酸序列为SEQIDNO:4。5.权利要求1‑4任一项所述的基因片段在构建鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株中的应用。6.一种鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株，其特征在于，所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株是将权利要求1‑4任一项所述的基因片段替换基因II型LaSota株基因组的对应部分的基因片段后构建的。7.如权利要求6所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株，其特征在于，所述的基因II型LaSota株基因组，其核苷酸序列为SEQIDNO:5。8.如权利要求6或7所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株，其特征在于，所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株，其构建方法包括如下步骤：1)构建包含基因II型新城疫病毒LaSota株基因组全长cDNA的重组质粒；2)在1)中构建的重组质粒上，用权利要求1‑4任一项所述的基因片段替换LaSota株基因组的对应部分片段获得全长重组质粒；3)将2)中构建的全长重组质粒与表达新城疫病毒LaSota毒株NP、P和L基因的真核表达质粒共转染能够表达T7聚合酶的细胞，获得鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株。9.如权利要求6所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株，其特征在于，所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株的保藏编号为CGMCCNo.21900。10.一种疫苗，其特征在于，所述的疫苗的抗原包含有权利要求6‑9任一项所述的鸽源新城疫病毒重组弱毒疫苗株。2CN113736800A说明书1/13页一种鸽源新城疫病毒重组疫苗株及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种鸽源新城疫病毒重组疫苗株及其构建方法和应用。背景技术[0002]新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)强毒株感染禽类引起的一种重要的传染病。该病是以呼吸道、消化道损伤为典型特征的高度接触性、急性败血性传染病，传播速度快，病死率高，给世界养禽业造成巨大的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将新城疫列为法定报告的动物疫病，我国农业农村部将其列为一类动物疫病。[0003]新城疫病毒NDV为单股、负链、不分节段的RNA病毒，属于副黏病毒科，基因组结构为3′‑NP‑P‑M‑F‑HN‑L‑5′。该病毒可感染240多种鸟类，其中家鸡和珠鸡最易感染，但近年来新城疫病毒感染并致病的宿主范围有扩大的趋势。[0004]鸽新城疫，俗称鸽瘟，是由鸽