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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114456233A(43)申请公布日2022.05.10(21)申请号202210245984.4C07K1/04(2006.01)(22)申请日2022.03.14A61K47/18(2006.01)A61K47/28(2006.01)(71)申请人天津科技大学A61K8/64(2006.01)地址300457天津市滨海新区天津经济技A61K8/63(2006.01)术开发区第十三大街9号A61Q19/00(2006.01)(72)发明人李明媛李世勤李媛贾琳苏雯户博蕊马文林孔祥舜谢焱博(74)专利代理机构天津盛理知识产权代理有限公司12209专利代理师韩晓梅(51)Int.Cl.C07K7/06(2006.01)C07K1/107(2006.01)C07K1/06(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图18页(54)发明名称前景。一种细胞穿透肽-甾醇耦合物及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物及其制备方法,其中所述甾醇为胆固醇、麦角固醇、β‑谷甾醇、豆甾醇、羊毛甾醇,细胞穿透肽氨基酸序列为自主设计,包括CGYKK(半胱氨酸‑甘氨酸‑酪氨酸‑赖氨酸‑赖氨酸)、CGYRR(半胱氨酸‑甘氨酸‑酪氨酸‑精氨酸‑精氨酸)、CGYYK(半胱氨酸‑甘氨酸‑酪氨酸‑酪氨酸‑赖氨酸)。本发明采用Fmoc固相合成法合成细胞穿透肽,收率高,合成速度快;利用溴乙酸或吡啶酸与甾醇形成中间体化合物,继而与多肽链连接,产物纯度高,杂质少。细胞穿透肽‑甾醇耦合物作为脂质材料用于纳米药物递送系统,一方面可提高纳米载体与细胞的转染效率,另一方面,在完成转染进入细胞后可被胞内酯酶降解为甾醇和氨基酸,均为细胞生长可利用的营养成分,细胞毒性低。除此之外,不同生物活性的甾醇母核可赋予相应耦合物不同的功能,使得这类新型脂质材料在生物CN114456233A医药、保健品以及化妆品领域中具有广阔的应用CN114456233A权利要求书1/2页1.一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物的制备方法,其特征在于:由肽链和甾醇通过化学反应连接,所述肽链采用Fmoc固相合成法合成的五肽。2.如权利要求1所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物的制备方法,其特征在于:所述细胞穿透肽‑甾醇耦合物带正电荷。3.如权利要求1所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物的制备方法,其特征在于,所述细胞穿透肽C端为精氨酸或者赖氨酸,同时提供正电荷。4.如权利要求1所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物的制备方法,其特征在于,利用溴乙酸或吡啶酸与甾醇形成中间体化合物,继而与多肽链连接。5.如权利要求1所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物,其特征在于:所述甾醇为胆固醇或麦角固醇或β‑谷甾醇或豆甾醇或羊毛甾醇。6.一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物,其特征在于:所述细胞穿透肽的结构选自CGYKK、CGYRR、CGYYK的任意一种,其中,CGYKK的结构式为:CGYRR的结构式为:CGYYK的结构式为:2CN114456233A权利要求书2/2页7.如权利要求1‑6中任一项所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物在制备纳米载体中的应用。8.如权利要求7所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物在制备纳米载体中的应用,所述纳米载体为脂质纳米颗粒、纳米微球、脂质体、外泌体、胶束。9.如权利要求7所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物在制备纳米载体中的应用,其特征在于,将细胞穿透肽‑甾醇耦合物与磷脂材料混合,通过有机溶剂溶解,再以薄膜分散法或逆向溶剂挥发法或微流控法制备具有包载递送功能的纳米载体。10.如权利要求1‑9中任一项所述的细胞穿透肽‑甾醇耦合物在制备药品、保健品、化妆品中的应用。3CN114456233A说明书1/11页一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域,涉及一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物及其制备方法。背景技术[0002]细胞穿透肽是一类对带正电荷,对细胞膜具有强力穿透作用的短肽,可用来修饰脂质体、纳米粒、胶束等纳米药物递送系统,促进细胞摄取,目前在药物递送领域受到了广泛关注。以脂质体为例,细胞膜表面带有负电荷,普通脂质体的入胞能力有限,经细胞穿透肽修饰的脂质体表面带有正电荷,与细胞膜产生静电吸附作用,可显著提高脂质体的入胞效率。[0003]一种细胞穿透肽‑甾醇耦合物是指经细胞穿透肽修饰的甾醇,甾醇包括胆固醇、麦角固醇、β‑谷甾醇、豆甾醇、羊毛甾醇等。胆固醇是哺乳动物细胞膜的主要组成部分,能与磷脂产生相互作用,调节脂膜结构、动力学特性等,化学结构如图1。同时,胆固醇在人体内具有重要生理作用,是胆汁酸和类固醇激素合成的前体。胆固醇可作为脂质体膜材、乳化剂、软膏基质等药用辅料,尤其在脂质体制剂中对提高制剂稳定性有重要作用。在制备脂质体时添加适量的胆固醇,可使膜保