一种牡蛎活性肽的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114250260A(43)申请公布日2022.03.29(21)申请号202011017784.0C07K1/16(2006.01)(22)申请日2020.09.24(71)申请人赵德润地址265600山东省烟台市蓬莱市北均镇上口赵家村131号(72)发明人赵德润(74)专利代理机构沈阳圣群专利事务所(普通合伙)21221代理人王玉信(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种牡蛎活性肽的制备方法(57)摘要本发明公开了一种牡蛎活性肽的制备方法，包括以下步骤，S1：将牡蛎放入水中浸泡20‑30min，将牡蛎清洗干净，除去泥沙得到牡蛎肉，将清洗后的牡蛎肉放入破碎机中破碎成2‑3cm的小块，将牡蛎研磨成粉，过200‑300目筛。本发明首先将牡蛎粉末在液氮中进行低温冷冻处理，能够使牡蛎变脆，将牡蛎充分粉碎，有利于活性肽的溢出，便于后期处理，通过对牡蛎粉末进行酸解处理，可以除去牡蛎壳中的碳酸钙，使活性肽从牡蛎壳体中分离出来，再利用纤维素酶、蛋白酶对牡蛎进行酶解，最后通过吸附剂能够吸附牡蛎中的重金属离子和其他杂质，提高活性肽的纯度，再利用碱性物质使蛋白发生沉淀，使活性肽溢出，从而提高活性肽的纯度和提取效率。CN114250260ACN114250260A权利要求书1/1页1.一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将牡蛎放入水中浸泡20-30min，将牡蛎清洗干净，除去泥沙得到牡蛎肉，将清洗后的牡蛎肉放入破碎机中破碎成2-3cm的小块，将牡蛎研磨成粉，过200-300目筛，然后在放入液氮中浸泡5-7min后进行高压均质，得到牡蛎细粉，往反应釜内投入牡蛎细粉，加入牡蛎细粉重量3-6的倍水，混合均匀，在反应釜压力为20-25Mpa下进行均质乳化，杀菌，得到牡蛎均质液，用过滤器将均质液和残渣分离，冷却均质液，将均质液蒸发得到牡蛎粉末；S2：将牡蛎粉末用酸性溶液进行酸解，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、纤维素酶、蛋白酶和吸附剂，在反应釜30-60℃下搅拌处理40-60min，然后过滤，取滤液备用；S3：在滤液中加入碱性物质，在60-90℃下静置12-18h，用超声处理30-60min，得到处理液；S4：将处理液用超滤膜过滤，得到澄清液和浓缩液，将牡蛎浓缩液在25-35℃温度下发酵48-60h，得到牡蛎发酵液，对牡蛎发酵液用HCL或NaOH调pH值至8.5，待pH值稳定后再连续搅拌浸提，离心，用生物传感器测定高温灭酶后的牡蛎酶解液中氨基酸的含量，通过SephadexG-25层析柱对牡蛎酶解液进行分离，以超纯水为洗脱液洗脱，收集各洗脱峰，冻干后，凝胶柱脱盐得到牡蛎活性肽。2.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述牡蛎选自黑缘牡蛎、团聚牡蛎、覆瓦牡蛎、近江牡蛎、长牡蛎以及生牡蛎中的至少一种。3.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述牡蛎的预处理工艺为：将牡蛎在清洗液中超声清洗10-20min，所述清洗液选自丙酮、乙醇以及乙醚中的一种。4.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述S4中SephadexG-25层析柱过程中采用的凝胶为SephadexG-10、SephadexG-15、SephadexG-25或Bio-Gel-p-2、Bio-Gel-p-4、Bio-Gel-p-6其中的一种。5.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述S2中酸性溶液选自盐酸、硝酸、硫酸、硼酸、高氯酸、硫氰酸、亚硫酸、磷酸、亚磷酸、次氯酸等中的至少一种。6.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述S2中纤维素酶选自葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶、β－葡萄糖苷酶、纤维二糖酶、氧化纤维素酶以及纤维素磷酸化酶中的至少一种；所述蛋白酶选自胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及风味蛋白酶中的至少一种。7.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述S2中吸附剂选自活性炭、活性炭纤维、沸石、腐植酸系吸附剂、煤质吸附剂、海泡石和聚糖树脂中的至少一种。8.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述S3中碱性溶液选自氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾以及四甲基氢氧化铵中的至少一种。9.根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自丙酮、甘油、乙二醇、甲醇、乙醇、乙丙醇、正丙醇、醋酐、正丁醇、甲乙酮、醋酸戊脂和醋酸乙酯中的至少一种。2CN114