一种溶酶体靶向荧光探针及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114957082A(43)申请公布日2022.08.30(21)申请号202210711226.7(22)申请日2022.06.22(71)申请人苏州优逸兰迪生物科技有限公司地址215100江苏省苏州市漕湖产业园春耀路18号1号楼302-1室(72)发明人谈雪良吴运阁钱近春郑慧敏夏继波(74)专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司32103专利代理师孙周强(51)Int.Cl.C07D209/12(2006.01)C09B23/00(2006.01)C09K11/06(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图8页(54)发明名称一种溶酶体靶向荧光探针及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及一种溶酶体靶向荧光探针及其制备方法和应用，为一种活细胞内酸性细胞器染料。目前市售的大部分溶酶体探针，其发射峰的位置普遍处于蓝光、黄光范围内，而荧光抗体或其他功能性荧光染料通常也出现在此波段，通常细胞内自发荧光位于蓝绿区，若荧光指示剂位于该波段或附近的紫外区波段会相互重叠，影响成像，为解决这一困境，本发明开发红光谱区的溶酶体染料，尤其能在较低的纳摩尔浓度下特异性的标记和追踪活细胞中的酸性细胞器。CN114957082ACN114957082A权利要求书1/2页1.一种溶酶体靶向荧光探针，其为以下化学结构式中的一种：其中，R1、R2独立的选自氢、烷基、醚基等；R3、R4独立的选自氢、烷基、烷基磺酸、烷基磺酸离子等。2.根据权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针，其特征在于，烷基为直链烷基或者环烷基，烷基的碳原子数为1～20；醚基中的烷基的碳原子数为2～6；烷基磺酸为(CH2)nSO3H，n为‑1～10；烷基磺酸离子为(CH2)mSO3，m为1～10。3.根据权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针，其特征在于，所述溶酶体靶向荧光探针具有配位离子，或者不具有配位离子。4.权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针的制备方法，其特征在于，将吲哚化合物与羟基环丁烯化合物反应，得到所述溶酶体靶向荧光探针；所述吲哚化合物的化学结构式如下结构式中的一种或两种：、、。2CN114957082A权利要求书2/2页5.根据权利要求4所述溶酶体靶向荧光探针的制备方法，其特征在于，吲哚化合物与羟基环丁烯化合物反应的温度为120～200℃，时间为2～6小时。6.权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针作为溶酶体探针的应用或者在制备溶酶体探针中的应用。7.权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针在细胞显影中的应用，或者在制备细胞显影剂中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，细胞显影为红光显影。9.一种细胞显影方法，其特征在于，将细胞与权利要求1所述溶酶体靶向荧光探针共培养，然后进行显影，完成细胞显影。10.根据权利要求9所述细胞显影方法，其特征在于，共培养的时间为5～30分钟。3CN114957082A说明书1/9页一种溶酶体靶向荧光探针及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种溶酶体靶向荧光探针及其制备方法和应用，为一种活细胞内酸性细胞器染料。背景技术[0002]溶酶体作为真核细胞中的一种细胞器，内含多种水解酶，不仅可以分解外源大分子物质，也可消化细胞自身的局部细胞质或细胞器。衰老的细胞中，程序性破裂的溶酶体释放出水解酶，使细胞被消化而死亡。[0003]溶酶体的pH值低，并且溶酶体内的酶大多仅在这种酸性环境中发挥作用。溶酶体参与细胞中的物质代谢、生物体内循环、凋亡等多种生命活动。溶酶体具有高度动态的特性，其数量和形态的变化直接代表细胞所处的生命活动状态，溶酶体异常通常会引发多种疾病，如痛风、溶酶体贮积症、矽肺等。因此，着力溶酶体的研究分析，了解溶酶体参与生物活动的分子机制，对相关疾病的治疗具有重要的指导作用。为了实现其上述功能，所研发的探针首要要求就是对溶酶体特异性高、且对其生理功能干扰小。[0004]商业化的溶酶体探针通过标记溶酶体膜来实现溶酶体定位分析，例如经典的LysoTracker系列，毫摩尔浓度下特异性标记酸性细胞器，实现了在荧光成像中进行溶酶体定位的功能。但是目前市售的大部分溶酶体探针，其发射峰的位置普遍处于蓝光、黄光范围内，而荧光抗体或其他功能性荧光染料通常也出现在此波段，这就给多色成像中需要染色溶酶体的实验人员在染料的波段选择上带来了较大难度。通常细胞内自发荧光位于蓝绿区，若荧光指示剂位于该波段或附近的紫外区波段会相互重叠，影响成像，因此为解决这一困境，需要开发新的发光溶酶体染料，可满足多通道荧光成像的需求。基于上述原因，开发红光谱区的溶酶体染料是比较理想的选择，但是现有技术未见此类探针的报道。发明内容[0005]本发明