生化实验 实验四、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清ldh.ppt

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离LDH【实验原理】一、概述1、电泳概念：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。2、电泳技术优点：快速、准确、重现性好3、电泳方法分类4、电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽）二、电泳的基本原理1、带电颗粒的物理性状包括带电颗粒电荷数，颗粒大小、形状和空间构型。Q↑，v↑；r↑，v↓。2．支持物介质支持物的多孔结构——电渗作用多孔支持物表面可吸附电极溶液中的正离子或负离子使靠近支持物的溶液层相对带电，在电场作用下，溶液就会向一定方向移动。凝胶支持物结构的孔隙对带电颗粒分子产生阻力。3．缓冲溶液：①pH值：溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度，亦即决定Q。②离子强度：一般最适的离子强度在0.02～0.2之间，溶液的离子强度越高，则电泳速度越慢。③溶液粘度：迁移率与溶液粘度呈反比关系。4．电场强度（E）：电场强度是电泳支持物上每厘米的电位降，也称电势梯度。E↑，v↑聚丙烯酰胺凝胶的性能聚丙烯酰胺凝胶的制备聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理一、聚丙烯酰胺凝胶的性能丙烯酰胺（Acr，单体）＋N,N-甲叉双丙稀酰胺（Bis，交联剂）→（催化剂）→聚合催化剂：（1）过硫酸铵＋四甲基乙二胺（TEMED）（2）核黄素（VitB2）＋光根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。.【凝胶总浓度及交联度对凝胶的影响】pH8.3Tris-甘氨酸缓冲液1959年Markert等用电泳的方法将纯化的心肌乳酸脱氢酶(LDH)分离出5条区带，由阳极到阴极依次命名为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5。【乳酸脱氢酶同工酶染色】电泳装置【凝胶电泳的操作要点】试剂实验报告