生化实验四--乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (2).ppt

乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白一实验目的二实验原理三器材与试剂四、实验步骤乙酸纤维素薄膜点样图薄膜点样面向上
点样端置于阴极端
平贴在
电泳槽支架上7、如要对血清各蛋白进行定量测定可采用下列方法。
（1）洗脱法
取试管5支，标号，分别加入0.4mol/L的NaOH溶液4.0ml。
将实验步骤四漂洗干净的薄膜用滤纸吸干，剪下各种蛋白质色带，分别放入各试管中，振荡约10min。
待色泽完全浸出后，以0.4mol/L的NaOH溶液为对照，与620nm处测得各管的吸光度，分别记为A清、Aα1、Aα2、Aβ、Aγ。各种血清蛋白的相对百分含量为：
个别蛋白质的A620值

所有蛋白质A620值总和

（2）光密度法
将步骤5中透明处理的薄膜用光密度计直接测定（数值参考书p29）

注意事项3、使用血清点样器直接在薄膜上进行血清点样，同样可以获得很好的效果。
4、电泳时间的长短，应以血清各组分最佳分离效果为标准，一般是在以移动最快的血清清蛋白距阳极约1cm处停止电泳。

电泳仪和电泳槽使用方法
1.用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，不要将正负极接反。
2.电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3.接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。
4.工作完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态，并拔出电泳插头。注意事项