一种用于保存胚胎的冷冻液、其制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102771472A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102771472A(43)申请公布日2012.11.14(21)申请号201210279781.3(51)Int.Cl.(22)申请日2012.08.07A01N1/02(2006.01)(66)本国优先权数据201210125210.42012.04.25CN(71)申请人余文莉地址100107北京市朝阳区北苑路红军营南路天郎园傲城融富中心B座2406室申请人李树静(72)发明人余文莉李树静(74)专利代理机构北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司11129代理人张涛权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书66页页附图附图11页(54)发明名称一种用于保存胚胎的冷冻液、其制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种用于保存胚胎的冷冻液，特别是用于保存取样胚胎的冷冻液。本发明冷冻液含乙二醇和蔗糖，其特征为还含有阿拉伯半乳糖、含牛血清白蛋白（Bovineserumalbumin，BSA）的缓冲溶液PBS，其配比为：阿拉伯半乳糖0.4～5g∶乙二醇75～85ml:蔗糖30～40g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS910～930ml；所述牛血清白蛋白在缓冲溶液中的含量为0.0021g/ml；配制时，将乙二醇、蔗糖和阿拉伯半乳糖溶解于含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS中。本发明充分利用乙二醇，蔗糖，阿拉伯半乳聚糖和牛血清白蛋白之间的相互配合、相互支持、协同作用以及充分发挥各组分的特点，本发明冷冻液对取样胚胎解冻后的发育率高于常规乙二醇冷冻液。CN10274ACN102771472A权利要求书1/1页1.一种用于保存胚胎的冷冻液，含乙二醇和蔗糖，其特征为还含有阿拉伯半乳糖、含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS，其配比为：阿拉伯半乳糖0.4～5g∶乙二醇75～85ml:蔗糖30～40g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS910～930ml；所述含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS中，所述牛血清白蛋白在缓冲溶液中的含量为0.0021g/ml；配制时，将乙二醇、蔗糖和阿拉伯半乳糖溶解于含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS中。2.根据权利要求1所述冷冻液，其各组分的配比为:阿拉伯半乳糖0.46～4.6g:乙二醇80ml:蔗糖30～32g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS920ml。3.根据权利要求2所述冷冻液，其各组分的配比为:阿拉伯半乳糖2.76～3.68g:乙二醇80ml:蔗糖30～32g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS920ml。4.根据权利要求3所述冷冻液，其各组分的配比为:阿拉伯半乳糖2.76g:乙二醇80ml:蔗糖30～32g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS920ml。5.根据权利要求4所述冷冻液，其各组分的用量为:阿拉伯半乳糖0.0276g，乙二醇0.8ml，蔗糖0.315008g，含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS9.2ml。6.权利要求1～5任一所述的冷冻液，所述胚胎是经切割取样的取样胚胎。7.权利要求1～5任一所述冷冻液的制备方法，包括如下步骤：（1）将阿拉伯半乳聚糖加入容器中，再加入缓冲溶液PBS，4℃静置溶解；（2）再加入蔗糖，4℃静置溶解；（3）再加入牛血清白蛋白BSA，勿摇动，4℃静置溶解；（4）再加入缓冲溶液PBS，得到混合液；（5）取步骤（4）所得混合液与乙二醇相混合，密封，4℃冰箱静置；上述各成分的配比为：阿拉伯半乳糖0.4～5g∶乙二醇75～85ml:蔗糖30～40g:含牛血清白蛋白的缓冲溶液PBS910～930ml，所述牛血清白蛋白在缓冲溶液中的含量为0.0021g/ml。8.权利要求1～5任一所述冷冻液在保存取样胚胎中的应用。2CN102771472A说明书1/6页一种用于保存胚胎的冷冻液、其制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及一种用于保存胚胎的冷冻液，特别涉及一种用于保存取样胚胎的冷冻液。本发明还涉及所述冷冻液的制备方法及应用。背景技术[0002]胚胎的冷冻是胚胎的保存方法，将胚胎置于冷冻液中保护并采取特殊的降温程序，使胚胎在超低温（液氮-196℃，液氦-269℃）下停止代谢。需要使用胚胎时，再通过特定的解冻程序使其恢复生存能力，从而达到长期保存胚胎的目的。[0003]为了性别鉴定和其它基因检测与分析，常常需要利用显微操作技术将胚胎组织切割下一小部分用于分析，将剩余部分冷冻保存备用。[0004]但胚胎被切割取样后会对胚胎造成损伤，如透明带破损、胚胎细胞数量减少、破坏细胞连接等，使胚胎对冷冻的耐受性降低。冻后的胚胎无论在形态正常率、冻后回收率，还是在胚胎发育率等方面都不够理想。[0005]冷冻液主要包括两种：慢速程序化冷冻液和玻璃化冷冻液。常规冷冻就是慢速程序化冷冻，慢速程序化冷冻液的组成和配比不是固定不变的，目前最常用的是乙二醇+