D-二聚体质控品及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103197083A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103197083103197083A(43)申请公布日2013.07.10(21)申请号201310090638.4(22)申请日2013.03.20(71)申请人上海太阳生物技术有限公司地址201108上海市闵行区金都路3419号(72)发明人谢永华(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵冯琼(51)Int.Cl.G01N33/96(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书5页说明书5页附图1页附图1页(54)发明名称D-二聚体质控品及其制备方法(57)摘要本发明涉及临床凝血检验项目质量控制领域，具体提供了一种制备D-二聚体质控品的方法。本发明提供的方法是将牛血浆复钙凝固后，加入可降解纤维蛋白的酶使纤维蛋白凝块溶解，用蛋白酶抑制剂终止反应，产生的D-二聚体母液用冻干保护液稀释，冷冻干燥，即得。本发明方法制备的D-二聚体质控品，对检测试剂变化敏感性好，且具有较好的稳定性，满足临床D-二聚体检验的质量控制要求。CN103197083ACN103978ACN103197083A权利要求书1/1页1.一种制备D-二聚体质控品的方法，其特征在于，取牛血浆与钙离子溶液混合，37℃水浴使血液凝固，再加入可降解纤维蛋白的酶，37℃水浴4～8小时使纤维蛋白凝块溶解，用抑制剂终止反应，获得D-二聚体母液，使用冻干保护液稀释母液，冷冻干燥，获得D-二聚体质控品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述牛血浆的制备方法为用牛颈静脉采集的血液，将血液按与抗凝剂以体积比为9:1加入抗凝剂，离心30分钟，相对离心力为2000～2500g，小心分离吸取上层血浆，即得；所述抗凝剂为2～5%柠檬酸三钠。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述钙离子溶液为0.01～0.05mol/L氯化钙溶液，加入量为所述牛血浆体积的30%～70%。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可降解纤维蛋白的酶为链激酶、纤溶酶中的任意一种。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述可降解纤维蛋白的酶为纤溶酶，加入反应体系后所述纤溶酶的终浓度为100～300U/mL。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抑制剂为抑肽酶，加入反应体系后所述抑肽酶的终浓度为0.1～1.0μg/mL。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冻干保护液包括3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸1～3%（w/v）、氯化钠1～5%（w/v）、叠氮钠0.5～3g/L、甘露醇5～20g/L、牛血清白蛋白10～30g/L，抑肽酶10000～100000KIU/L。8.根据权利要求1至7任一项所述的方法制备获得的D-二聚体质控品。2CN103197083A说明书1/5页D-二聚体质控品及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及临床凝血检验项目质量控制领域，特别涉及一种采用牛血浆制备D-二聚体质控品的方法。背景技术[0002]纤维蛋白原是哺乳动物血浆中含量最高的蛋白，在不同的哺乳动物之间具有高度同源性，在动物体内当纤维蛋白原被激活后纤维蛋白凝结块形成，血液凝固。在血液凝固的同时激活了纤维蛋白溶解系统，它是人体最重要的血液抗凝系统：当纤维蛋白凝结，纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原转化为纤溶酶，纤维蛋白溶解过程开始，纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段，形成纤维蛋白降解产物（FDP），FDP由：X、Y、D-二聚体、中间片段E片段等组成。[0003]D-二聚体是纤维蛋白降解产物中的最小片段，也是交联纤维蛋白的特异性降解产物，是反映凝血及纤溶活化的分子标志物，正常人血浆中D-二聚体含量甚微，但在伴有血栓和微血栓形成的许多疾病中都可导致D-二聚体的增高，所以它目前是反映体内高凝状态和继发纤溶亢进的重要敏感指标之一，也同样适用于监测血栓形成，纤溶增强及溶栓治疗。[0004]随着D-二聚体检验项目不断拓展到疾病诊断和治疗中的各个领域，使用配套的D-二聚体质控品对D-二聚体检验进行室内质量控制也显得尤为重要。目前国内应用的D-二聚体测定室内质控品均为国外进口产品，价格昂贵。也有文献报道用实验检测后剩余血浆来制备D-二聚体质控品，但该方法使用的原料来源为人血浆，不易获得，不适用于商品化生产。发明内容[0005]有鉴于此，本发明提供一种采用牛血浆制备D-二聚体质控品的方法及获得的D-二聚体质控品。本发明方法制备的D-二聚体质控品，对检测试剂变化敏感性好，且具有较好的稳定性，满足临床D-二聚体检验的质量控制要求。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0007]本发明提供了一种制备D-二聚体质控品的方法，取牛血浆与钙离子溶液混合