一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108196043A(43)申请公布日2018.06.22(21)申请号201711218422.6(22)申请日2017.11.28(71)申请人泰州泽成生物技术有限公司地址225300江苏省泰州市中国医药城口泰路西侧、陆家路东侧G59幢62号西半侧一至四层(72)发明人刘振世季连星孔晓凯王赟石慧赵飏(74)专利代理机构北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙)11411代理人黄冠华(51)Int.Cl.G01N33/532(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒，包括抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液；抗试剂A是碱性磷酸酶标记的尿微量白蛋白衍生物；抗试剂B是FITC标记的尿微量白蛋白多克隆抗体，磁微粒试剂是包被有FITC抗体的羧基磁微粒混，同时还公开了该试剂盒的制备方法。该试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测性能大大提高(灵敏度、精密性、检测范围等)，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于35min,明显快于同类试剂盒)；偶联效率高，结合牢固，且工艺稳定，在提高产品性能的同时，大大降低了产品成本。CN108196043ACN108196043A权利要求书1/2页1.一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒，其特征在于，包括：抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液；其中，所述抗试剂A是碱性磷酸酶标记的尿微量白蛋白衍生物，含BSA的抗试剂A缓冲液；所述碱性磷酸酶标记的尿微量白蛋白衍生物是通过偶联剂将尿微量白蛋白衍生物和碱性磷酸酶偶联后获得，浓度为0.2ug/mL；所述抗试剂A缓冲液为10～100mM的Tris-HCl溶液，pH值为7-8，含有浓度为2-6wt％的PEG-6000、0.7-0.9wt％的氯化钠、0.05-0.1wt％的叠氮钠、0.3wt％的PC-300、0.1-1wt％牛血清白蛋白以及20mMEDTA；所述抗试剂B是FITC标记的尿微量白蛋白多克隆抗，含BSA的抗试剂B缓冲液；所述FITC标记的尿微量白蛋白抗体是通过偶联剂将尿微量白蛋白抗体和FITC偶联后获得，浓度为1.0ug/mL；；所述抗试剂B缓冲液为10～100mM的Tris-HCl溶液，pH值为7-8，0.12wt％的ANS、2-6wt％的PEG-6000、0.7-0.9wt％的氯化钠、0.05-0.1wt％的叠氮钠、0.3wt％的PC-300、0.1-1wt％牛血清白蛋白以及20mMEDTA；所述磁微粒试剂是包被有FITC抗体的羧基磁微粒混悬液；羧基磁微粒用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺在pH4.5-pH5.5下活化，加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用pH7.6的0.01M的PBS缓冲液洗去多余化活化剂；加入适量的FITC多克隆抗体，使其浓度为0.5uL/mg磁微粒，在pH7.4-pH7.8下震荡反应，反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1％牛血清白蛋白的0.01M的PBS缓冲液进行封闭，封闭结束后，加入封闭液以保存磁微粒，使磁微粒的最终浓度为2mg/ml；该磁微粒混悬液置于2-8℃保存，以备使用；所述校准品和质控品由人源性尿微量白蛋白和缓冲液组成，缓冲液为浓度50-200mM的Tris-HCl溶液，含有浓度为0.1～1wt％的牛血清白蛋白、0.05～0.5wt％的PC-300、5～50mM的乙二胺四乙酸二钠；所述尿微量白蛋白校准品包括人源性尿微量白蛋白浓度分别为0、1.5、6.0、25、100、400ug/ml的一组校准品；所述发光底物液是含有AMPPD的Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液的pH值为8.0～10.0，含有浓度20V％的AMPPD、16wt％的NaCl、0.4wt％的KCl和2.42wt％的Tris。2.根据权利要求1所述的检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述偶联剂选自碳化二亚胺、戊二醛、二异氰酸化合物或二卤化二硝基苯中的一种或多种。3.根据权利要求3所述的检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述FITC抗体选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、牛转铁蛋白和血蓝蛋白中的中的一种亚型或多种亚型的混合。4.根据权利要求1所述的检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒，其特征在于，所述羧基磁微粒为核壳结构，直径范围为100～4500nm，浓度为1～