牛大力种苗组织培养快速繁殖及育苗的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102893870A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102893870A(43)申请公布日2013.01.30(21)申请号201210405476.4(22)申请日2012.10.09(71)申请人冯志祥地址537500广西壮族自治区容县石寨镇大华大口塘组(广西侨旺生物技术有限公司)(72)发明人冯志祥张桂琴黄雪娟(74)专利代理机构玉林市振盛专利商标代理事务所45109代理人邱振泉(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书权利要求书22页页说明书说明书66页页(54)发明名称牛大力种苗组织培养快速繁殖及育苗的方法(57)摘要本发明公开了一种牛大力种苗组织培养快速繁殖及育苗的方法，其特征是通过采外殖体、无菌分化、快速增殖、壮苗培养，再装袋育壮苗，采用牛大力茎段、芽苞和叶片作为外植体，消毒，配制分化培养基，壮苗培养基，用定向聚丙烯薄膜袋作为培养皿器，接种，培养。当小苗形成的植株长至3～8厘米时，将培养袋苗转移到自然光下炼苗7～14天，然后将其从袋中取出，洗净根部的培养基，移至装有营养土的营养杯栽培，经2～5个月生长得到中苗，成为生产栽培的种苗。中苗最好为苗高15cm以上，每株苗有分叉2～8条，有3～10条根以上，须根多，叶片厚浓绿，无病虫，无变异苗白化苗。CN1028937ACN102893870A权利要求书1/2页1.一种牛大力种苗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于通过采外殖体、无菌分化、快速增殖、壮苗培养，再装袋育壮苗，采用牛大力茎段、芽苞和叶片作为外植体，消毒，配制分化培养基，壮苗培养基，用定向聚丙烯薄膜袋作为培养皿器，接种，培养，其技术工艺步骤如下：(1)采外植体，选定牛大力的嫩枝条剪下，连芽和叶片保湿保鲜采集，选取芽苞和嫩叶放清水冲洗，然后用饱和洗衣粉水清洗，再用流动的清水漂洗5～10分钟。(2)无菌分化，把漂洗干净的牛大力芽苞或嫩叶片作为外植体，在无菌接种室工作台上用72％～75％的酒精消毒10～15秒后，用无菌水冲洗3～8次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒10～30分钟，再用无菌水漂洗6～10次，后置于10～15％的过氧化氢中消毒10～15分钟，再用无菌水漂洗4～8次去掉外表杂物。把所消毒的芽苞、叶片放到150倍以上的电子显微镜下，用解剖刀切割外表的杂物，清理外表杂物后取下顶尖的芽尖0.2～0.25mm组织，用接种针接种到分化培养基上培养5～20天得到小植株，所述的分化培养基每升含椰子汁50～150ml，蔗糖15～45g，卡拉胶6～10g，肌醇50～150mg，甘氨酸1～3mg，烟酸1～3mg，D-泛酸钙0.1～0.5mg，吡哆辛盐酸0.2～3.5mg，生长素0.09～0.25mg，分裂素6BA0.1～0.3mg，烯腺嘌呤0.01～0.03mg，其余为MS培养基中的1/2大量元素和微量元素成分。(3)快速增殖，培养5～20天后，将诱导出的小植株切割成0.3～0.5mm后接入新的分化培养基中，多次继代采用分化培养基，在每次转袋过程中，不断淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黄叶片，经5～10次转袋培养后，得到的小植株再进行壮苗培养。(4)壮苗培养，将无菌分化增殖获得的小植株接种到壮苗培养基上培养45～60天得到小苗，所述的壮苗培养基每升含水解酪蛋白1～5g，蔗糖10～35g，卡拉胶6～10g，a-萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇20～120mg，盐酸硫胺5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，烟酸0.5～5mg，吲哚丁酸0.1～3mg，D-泛酸钙1～6mg，吡哆辛盐酸0.4～1.5mg，生长素0.09～0.25mg，苹果汁10～30g，其余为MS培养基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。2.按照权利要求1所述的牛大力种苗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于步骤(2)分化培养基每升含椰子汁50～100ml，蔗糖15～45g，卡拉胶8g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.25mg，D-泛酸钙0.44mg，吡哆辛盐酸0.4～1.5mg，生长素0.09～0.25mg，分裂素6BA0.1mg，烯腺嘌呤0.02mg，其余为MS培养基中的1/2大量元素和微量元素成分。3.按照权利要求1所述的牛大力种苗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于步骤(4)壮苗培养基每升含水解酪蛋白0.12g，蔗糖22g，卡拉胶8g，a-萘乙酸0.8mg，肌醇60mg，盐酸硫胺6mg，甘氨酸3.0mg，烟酸1.5mg，吲哚丁酸0.3mg，D-泛酸钙1.5mg，吡哆辛盐酸0.8mg，生长素0.12mg，苹果汁12g，其余为MS培养基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。4.按照权利要求1所述的牛大力种苗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于步骤(2)～(4)中所用的培养基PH为4.5～