金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103416305A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103416305103416305A(43)申请公布日2013.12.04(21)申请号201310305945.X(22)申请日2013.07.19(71)申请人福建省农业科学院农业生物资源研究所地址350003福建省福州市鼓楼区五四路247号(72)发明人陈菁瑛(74)专利代理机构福州科扬专利事务所35001代理人徐开翟(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书8页说明书8页(54)发明名称金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法(57)摘要本发明涉及一种金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法，包括以下四个组织培养阶段：①种子无菌萌发形成原球茎；②原球茎的增殖与小苗分化培养；③无菌苗壮苗培养；④生根培养，不同的组织培养阶段采用不同的无激素培养基。本发明操作简便、程序少、费用低廉，不需要对组培苗进行频繁继代，且在整个培养过程中不使用外源植物激素，较好地解决了目前普遍存在于金线莲组织培养过程中的大量使用外源植物激素、生产成本高、种苗参差不一及食用不安全等问题，不仅大大提高了种苗质量和移栽成活率，而且提高了种苗使用的安全性。CN103416305ACN103465ACN103416305A权利要求书1/1页1.一种金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下四个组织培养阶段：（1）种子无菌萌发形成原球茎：选择金线莲近成熟的蒴果，进行蒴果表面消毒灭菌处理后，将蒴果切开，取出种子均匀播种在无激素种子萌发培养基上，播种后的培养瓶置于温度20-28℃、无光照条件下培养诱导种子萌发，培养时间30-40天，使种子膨大、萌发形成白色或乳黄色的原球茎；所述无激素种子萌发培养基为：MS或N6基本培养基+土豆泥100-150g/L+白糖20-30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.4-5.8；（2）原球茎的增殖与小苗分化培养：将第（1）阶段获得的原球茎转入无激素增殖与分化培养基中，培养温度20-28℃，光照强度1500-2500lx，光照时间8-12小时/天，培养时间60-90天，使原球茎增殖并分化形成带叶和茎的芽或者具有叶、茎及胚根的无菌苗；所述的无激素增殖与分化培养基为：MS或N6基本培养基+土豆泥100-200g/L+番茄汁50-100g/L+蛋白胨1-3g/L+白糖20-30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.4-5.8；（3）无菌苗壮苗培养：将第（2）阶段获得的已分化的芽或无菌苗转移进行1-2次的壮苗培养，每次壮苗培养由以下两个依次进行的培养周期组成：第一个培养周期：将无菌苗转入无激素壮苗培养基A中，培养时间30-50天，培养温度20-28℃，光照强度1500-2500lx，光照时间8-12小时/天；所述无激素壮苗培养基A为：MS或N6基本培养基+土豆泥100-150g/L+蛋白胨1-3g/L+活性炭0.5-2.0g/L+白糖20-30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.4-5.8；第二个培养周期：将无菌苗转入无激素壮苗培养基B中，培养时间30-50天，培养温度20-28℃，光照强度1500-2500lx，光照时间8-12小时/天；所述无激素壮苗培养基B为：MS或N6基本培养基+土豆泥50-100g/L+香蕉泥100-200g/L+活性炭0.5-2.0g/L+白糖20-30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.4-5.8；第1次壮苗培养结束后，选择具有2片以上叶片且株高2cm以上的无菌壮苗进入第（4）阶段的生根培养，其余的弃用或者接着进行第2次壮苗培养；第2次壮苗培养结束后，选择具有2片以上叶片且株高2cm以上的无菌壮苗进入第（4）阶段的生根培养；（4）生根培养：将第（3）阶段获得的无菌壮苗转入无激素生根培养基中，培养温度20-28℃，光照强度1500-2500lx，光照时间10-14小时/天，培养时间40-60天；所述无激素生根培养基为：MS或N6基本培养基+香蕉泥100-200g/L+土豆泥0-50g/L+活性炭1-2g/L+白糖20-30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.4-5.8。2.根据权利要求1所述的金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）所选择的金线莲近成熟的蒴果指金线莲人工授粉后50-80天、饱满、硬实、无病虫危害且外表为红色或浅棕色的蒴果，或者野生金线莲自然授粉后、饱满、硬实、无病虫危害且外表为红色或浅棕色的蒴果。3.根据权利要求1或2所述的金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：所述的蒴果表面