酶法检测脂肪酶试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103173518A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103173518103173518A(43)申请公布日2013.06.26(21)申请号201110430794.1(22)申请日2011.12.20(71)申请人上海复星医药（集团）股份有限公司地址200010上海市黄浦区复兴东路2号申请人上海复星长征医学科学有限公司(72)发明人景晟孙卫兵(74)专利代理机构上海新天专利代理有限公司31213代理人王巍(51)Int.Cl.C12Q1/44(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书9页说明书9页(54)发明名称酶法检测脂肪酶试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种酶法检测脂肪酶试剂盒。本发明试剂盒由试剂1和试剂2组成。试剂1：2L缓冲液10-200mmol/L、脱氧胆酸钠0.01-20ml/L、辅脂肪酶0.1-2mg/L、氯化钙5-20mmol/L和叠氮钠0.5-2g/L，去离子水加至总体积为2L。试剂2：1L酒石酸10-200mmol/L、牛黄脱氧胆酸钠0.1-10mmol/L、甘露醇10-200mmol/L、proclin3000.01-0.5ml/L、巯基乙酸10-200mmol/L、6-甲基试卤灵0.1-0.5mmol/L，去离子水加至总体积为1L。本发明的试剂盒，对底物有很强的保护作用，提高了试剂的稳定性。本发明的试剂盒检测效果好，有较大的临床应用价值。CN103173518ACN103758ACN103173518A权利要求书1/2页1.一种酶法检测脂肪酶试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由下列试剂1和试剂2按1份∶1份的比例组成：试剂1：2L去离子水加至总体积为2L；试剂2：1L去离子水加至总体积为1L。2.根据权利要求1所述酶法检测脂肪酶试剂盒，其特征在于，所述试剂1的缓冲液选自TRIS、MOPS或HEPES。3.一种如权利要求1所述酶法检测脂肪酶试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂盒由下列试剂1和试剂2按1份∶1份的比例组成：试剂1：2L去离子水加至总体积为2L；试剂2：1L2CN103173518A权利要求书2/2页去离子水加至总体积为1L；所述制备方法包括下列步骤：(一)制备试剂1：2L(1)先向容器内加入为总量80％的去离子水；(2)依次加入缓冲液、脱氧胆酸钠、氯化钙、叠氮钠；(3)加入辅脂肪酶；(4)最后加入去离子水至总体积为2L，混合均匀，即得；(二)制备试剂2：1L向容器内依次加入牛黄脱氧胆酸钠、甘露醇、proclin300、巯基乙酸、6-甲基试卤灵，去离子水加至总体积为1L，混合均匀，即得。3CN103173518A说明书1/9页酶法检测脂肪酶试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物试剂，具体涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种酶法检测脂肪酶试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]脂肪酶(LipaseEC3.1.1.3.，LPS，甘油酯水解酶)是一类水解油酯的酶类。脂肪酶的水解底物一般是天然油脂，其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键。它不同于其它水解酶，脂肪酶催化作用系统是一种非均相体系，水溶性的酶催化作用发生在水不溶性底物和水的界面上，这种界面上的催化作用机制不甚清楚，不能简单用Michaelis2Menten学说解释酶与底物间的反应机制。有人提出了脂肪酶在油-水界面上定位的假设，提出了“超底物”的模型，该模型能解释脂肪酶的一些行为，但还需要进一步的实验证明和修正。此外，脂肪酶兼具有逆向催化甘油和游离脂肪酸合成甘油脂活性。脂肪酶在临床的意义：正常人血液LPS含量极少，但在急性胰腺炎时，2～12h血液LPS显著升高，24h至峰值，可达正常值上限的10倍，甚至50倍，至48～72h可能恢复正常，但随后又可持续升高8～15天。由于血液LPS在急性胰腺炎时活性升高的时间早，上升的幅度的大，持续的时间长，故其诊断价值优于淀粉酶。临床观察发现，凡血液AMY升高的病例，其LPS均升高；而LPS升高者AMY不一定升高，约有2/3AMY正常的胰腺炎病人，其LPS正常；非胰腺炎的急腹症有血液AMY升高而LPS不升高。酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血液LPS可有不同程度的升高。迄今测定LPS的方法可分为3类：①测定产物(游离脂肪酸)的增加(如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和pH电极法等)；②测定底物的减少量(如比浊法、扩散法等)；③测定LPS的实际质量(双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集法)。目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主。分光光度法目前有两类比较常用：①酶偶联显色比色法，多用1，2-甘油二酯为底物，在LPS和单酸甘油酯脂肪酶的催化下，水解生成甘油和脂肪酸，甘油