糖化白蛋白酶法检测试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104164473104164473A(43)申请公布日2014.11.26(21)申请号201310180869.4(22)申请日2013.05.16(71)申请人北京豪迈生物工程有限公司地址100007北京市东城区板桥胡同4号(72)发明人鄢盛恺沈林(51)Int.Cl.C12Q1/37(2006.01)C12Q1/28(2006.01)C12Q1/26(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书4页说明书4页(54)发明名称糖化白蛋白酶法检测试剂盒及其检测方法(57)摘要一种糖化白蛋白酶法检测试剂盒，包括GA试剂1和GA试剂2，GA试剂1包括三羟甲基氨基甲烷、氨基安替比林(4-AAP)、蛋白酶K、乙酸钙(CaAc2)、三水合亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6·3H2O)、乙酸铜(CuAc2)和胆汁酸(Cholicacid)；GA试剂2包括三羟甲基氨基甲烷、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、果糖氨基酸氧化酶、曲拉通X-100(TritonX-100)和过氧化物酶。其目的是提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠的糖化白蛋白酶法检测试剂盒及其检测方法。CN104164473ACN104673ACN104164473A权利要求书1/1页1.糖化白蛋白酶法检测试剂盒，其特征在于：包括GA试剂1和GA试剂2，GA试剂1包括三羟甲基氨基甲烷、氨基安替比林(4-AAP)、蛋白酶K、乙酸钙(CaAc2)、三水合亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6·3H2O)、乙酸铜(CuAc2)和胆汁酸(Cholicacid)；GA试剂2包括三羟甲基氨基甲烷、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、果糖氨基酸氧化酶、曲拉通X-100(TritonX-100)和过氧化物酶。2.按照权利要求1所述的糖化白蛋白酶法检测试剂盒，其特征在于：所述GA试剂1采用如下步骤制成：(1)、称取6g三羟甲基氨基甲烷(TRIS)于容器中，加适量水使其完全溶解，加入盐酸调节pH，控制pH在7.95-8.05之间；(2)、称取0.4g氨基安替比林(4-AAP)、0.88g乙酸钙(GaAc2)、0.02g亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6)和0.09g乙酸铜(CuAc2)，加入到步骤(1)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解；(3)、称取10g胆汁酸(Cholicacid)，加入到步骤(2)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解，加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH，控制pH在7.95-8.05之间；(4)、称取3kU蛋白酶K，加入到步骤(3)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解。(5)、最后用纯化水将步骤(4)得到的溶液定容至1000ml，用0.2μμm滤器过滤，得到GA试剂1；所述GA试剂2采用如下步骤制成：(一)、称取6g三羟甲基氨基甲烷(TRIS)于容器中，加适量水使其完全溶解，加入盐酸调节pH，控制pH在7.95-8.05之间；(二)、称取1.47gN-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)，加入到步骤(一)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解；(三)、用移液器吸取0.5ml曲拉通X-100(TritonX-100)，加入到步骤(二)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解，加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH，控制pH在7.95-8.05之间；(四)、称取100kU果糖氨基酸氧化酶和200kU过氧化物酶，加入到步骤(三)得到的溶液中，充分搅拌使其完全溶解；(五)、最后用纯化水将步骤(四)得到的溶液中定容至1000ml，用0.2μμm滤器过滤，得到GA试剂2。3.糖化白蛋白酶法检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：1、将6μl样本和240μl的GA试剂1混匀，37℃孵育5分钟；2、在546/700nm波长下测定吸光度A1，其中主波长为546nm，副波长为700nm；3、加60μl的GA试剂2混匀，37℃孵育5分钟；4、在546/700nm波长下测定吸光度A2，计算ΔA＝A1-A2；5、使用校准品(标准血清)，选用与校准品对应的质控品，质控测定值应在规定的范围内，采用以下公式计算：。2CN104164473A说明书1/4页糖化白蛋白酶法检测试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种糖化白蛋白(GA)酶法检测试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]人体中的葡萄糖与血清蛋白的N-末端发生非酶促的糖基化反应，其中90％与血清蛋白链内第189位赖氨酸结合，形成高分子的酮胺结构，总称为糖化血清蛋白，其中90％以上为糖化白蛋白。因此，糖化白蛋白(GlycatedAlbu