一种整合素靶向型载药白蛋白纳米粒制剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103239733A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103239733103239733A(43)申请公布日2013.08.14(21)申请号201210029287.1A61P35/00(2006.01)(22)申请日2012.02.09(71)申请人复旦大学附属肿瘤医院地址200032上海市徐汇区东安路270号(72)发明人虞先濬徐近吉顺荣王浩龙江刘辰张波徐永锋姚宛彤许文彦(74)专利代理机构上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268代理人吴桂琴(51)Int.Cl.A61K47/48(2006.01)A61K47/42(2006.01)A61K31/7068(2006.01)权权利要求书2页利要求书2页说明书4页说明书4页附图1页附图1页(54)发明名称一种整合素靶向型载药白蛋白纳米粒制剂及其制备方法(57)摘要本发明属医生技术领域，涉及一种整合素靶向型载药白蛋白纳米粒制剂及其制备方法。本发明由吉西他滨原料药、牛血清白蛋白BSA和RGD多肽以及注射用水、脱水剂、交联剂和氢氧化钠制成包载吉西他滨的白蛋白纳米粒靶向给药系统；所述载药白蛋白纳米粒分散性良好，粒径分布范围94-166nm，平均粒径为130nm，Zeta电位-30.77mV，包封率为92.16％，载药量为12.8％，30min突释率为53.25±2.23％，体外8小时累积释放率达到90％。经试验证实，本发明的靶向纳米粒能显著提高药物在靶部位的聚集，具有较好的缓释性和肿瘤靶向性，能提高化疗药物的治疗效果，并减轻化疗药物的毒副作用，提高患者对治疗的耐受性。CN103239733ACN103297ACN103239733A权利要求书1/2页1.一种整合素受体靶向型载药白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，由吉西他滨原料药、牛血清白蛋白BSA和RGD多肽以及注射用水、脱水剂、交联剂和氢氧化钠制成为包载吉西他滨的白蛋白纳米粒靶向给药系统；其中，所述白蛋白其水溶液的浓度为2.5-3.0％(g/ml)，RGD多肽浓度为5mg/ml，白蛋白纳米粒的浓度为15mg/ml；脱水剂与白蛋白水溶液的体积比为2∶1-3∶1；交联剂与白蛋白的氨基摩尔比为50-100％，RGD多肽与白蛋白纳米粒体积比为10∶1；吉西他滨原料药与白蛋白的质量比10-25％。2.按权利要求1所述的整合素受体靶向型载药白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的脱水剂为无水乙醇。3.按权利要求1所述的整合素受体靶向型载药白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的交联剂为戊二醛。4.一种制备权利要求1-3任一项整合素受体靶向型载药白蛋白纳米粒制剂的制备方法，其特征在于，其包括步骤：(1)制备白蛋白纳米粒：配制3.0％BSA溶液，1MNaOH调节pH至8.5，搅拌下滴加无水乙醇，至蓝色胶状液形成，继续搅拌，加入交联剂戊二醛，继续匀速搅拌，40℃低温旋转蒸发除去乙醇，过1μm滤膜，剩余胶状液12000rpm离心，除去上清，沉淀部分加蒸馏水复溶，得白蛋白纳米粒混悬液；(2)制备RGD偶联白蛋白纳米粒：取RGD多肽置灭菌离心管中，双蒸水试溶多肽，将溶解后的多肽吸回原管中，混匀，取双蒸水继续溶解多肽，混匀，使充分溶解，得浓度为10mg/ml多肽，将MBS用DMF溶为10mg/ml，按MBS∶白蛋白纳米粒＝1∶10的比例，向白蛋白纳米粒溶液中加入MBS，搅拌混匀，室温活化30分钟后，再按白蛋白纳米粒∶多肽＝1∶10的比例，加入溶解的多肽，混匀，室温反应，PBS透析，PH7.2，4℃过夜，得RGD偶联白蛋白纳米粒的混悬液；分别取多肽，加蒸馏水稀释为5mg/ml，以及RGD偶联白蛋白纳米粒混悬液；每支试管分别加入磷酸盐EDTA溶液，设对照管，对照管加磷酸盐EDTA溶液；再向每支试管中加入Ellman‘s试剂，混匀，反应，测在412nm处的吸光值，计算待测肽自由巯基的浓度，计算偶联率；(3)制备RGD偶联吉西他滨白蛋白纳米粒：采用吸附载药法对RGD偶联白蛋白纳米粒进行载药，按10％载药量计算投料，称取吉西他滨，以纯水配制成浓度为10mg/mL，加1MNaOH调节pH至8.5，加入纯水后，用吉西他滨溶液将沉淀的RGD偶联白蛋白纳米粒混悬，搅拌达吸附平衡，然后12000rpm离心制得载药纳米粒，用与原白蛋白溶液同体积的纯水将载药纳米粒混悬后冷冻干燥。5.按权利要求4的方法，其特征在于，所述的RGD多肽由5个氨基酸首尾成环形成，其序列为-Arg1-Gly2-Asp3-D-Tyr4-Lys5-，同时RGD环肽上再连接一个半胱氨酸，与BSA的巯基连接。6.按权利要求4的方法，其特征在于，所述的RGD偶联白蛋白纳米粒偶联率为32％。7.按权利要求4的方法，其特征在于，所述的RGD偶联吉