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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103554287103554287A(43)申请公布日2014.02.05(21)申请号201310480673.7A01G1/04(2006.01)(22)申请日2013.10.15(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20121132012.04.13(71)申请人甘肃省商业科技研究所地址730010甘肃省兰州市城关区雁南路18号兰州高新技术创新园创新大厦B座17楼(72)发明人陈朋严晓娟梁宁胡先望(74)专利代理机构兰州中科华西专利代理有限公司62002代理人李艳华(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书5页说明书5页(54)发明名称一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法(57)摘要本发明涉及一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,该方法包括以下步骤:⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基;⑵制备种子培养基;⑶制备发酵培养基;⑷将美味牛肝菌菌丝接种至马铃薯葡萄糖斜面培养基,经恒温培养得菌丝体;⑸菌丝体接种至种子培养基,经振荡培养得菌种种子液;⑹菌种种子液接种至发酵培养基,经振荡培养得发酵液;离心、洗涤、烘干、磨粉后,得到菌丝体干粉末;⑺菌丝体干粉末先超声提取再浸提得到多糖浸提液;⑻多糖浸提液与正丁醇-三氯乙酸溶液混合后离心后即得多糖提取液;⑼多糖提取液加乙醇静置,得沉淀物;⑽沉淀物离心、洗涤、干燥,即得美味牛肝菌多糖。本发明操作简单,成本低,多糖得率高。CN103554287ACN10354287ACN103554287A权利要求书1/2页1.一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,包括以下步骤:⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基:将马铃薯洗净去皮切碎,按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤,得到滤液A,该滤液A补足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g琼脂,使其pH值为6.0~8.0,在90~100℃温度下充分加热溶解后分装,在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得;⑵制备种子培养基:将马铃薯洗净去皮切碎,按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤,得到滤液B,该滤液B补足至1.0L加入5~10g葡萄糖,使其pH值为6.0~8.0,在90~100℃温度下充分加热溶解后分装,在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得;⑶制备发酵培养基:将马铃薯洗净去皮切碎,按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤,得到滤液C,该滤液C补足至1.0L加入5~10g葡萄糖,使其pH值为6.0~8.0,在90~100℃温度下充分加热溶解后分装,在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得;⑷真菌的发酵培养:接一环美味牛肝菌菌丝至所述马铃薯葡萄糖斜面培养基上,于28℃恒温培养4~10天后,置于4℃冰箱中,得到活化培养后的菌丝体;⑸接一环所述活化培养后的菌丝体至装有10mL所述种子培养基的试管中,并置于恒温振荡器上,在28℃条件下以100~200r/min的速率进行振荡培养4~10天,制得pH值为5.0~7.0的菌种种子液;⑹将所述菌种种子液按5~20%的接种量接种至含有所述发酵培养基的摇瓶中,并置于恒温振荡器上,在28℃条件下以100~200r/min的速率进行振荡培养4~10天,即得发酵液;所述发酵液在高速冷冻离心机中于5000r/min离心20min,得到菌丝体;所述菌丝体用蒸馏水洗涤后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉,得到菌丝体干粉末;所述发酵培养基在所述摇瓶中的装瓶量为10~30%;⑺在所述菌丝体干粉末中按1g:5mL~20mL的料液比加入去离子水,在功率为100~300W的条件下超声提取10~20min后,在温度为70~90℃的条件下浸提次数2~4次,每次1~3h,合并提取液,得到多糖浸提液;⑻将所述多糖浸提液与正丁醇-三氯乙酸溶液按1mL:1mL的比例,充分混合,在转速150r/min条件下,振荡15min,再静置45min,用高速冷冻离心机4000r/min离心20min,除掉变性蛋白质,将水相再加入相当于其体积的正丁醇-三氯乙酸溶液,反复多次直到上清液与有机相中间有清晰的分界面为止,视为蛋白质除尽,即得多糖提取液;⑼在所述多糖提取液中按其体积的2~4倍加入质量浓度为95%的乙醇,在4℃下静置24h,得到沉淀物A;⑽将所述沉淀物A经高速冷冻离心机以4000r/min离心10min后,得到沉淀物B,该沉淀物B经无水乙醇多次洗涤后置于真空干燥箱内,经50℃真空干燥至恒重,即得美味牛肝菌多糖。2.如权利要求1所述的一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,其特征在于:所述步骤⑷中美味牛肝