一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103675187103675187A(43)申请公布日2014.03.26(21)申请号201210334157.9(22)申请日2012.09.11(71)申请人上海诗丹德生物技术有限公司地址201203上海市浦东新区蔡伦路720弄2号楼103室(72)发明人费文静钱勇丁慧诸晨许纪峰谢天培(51)Int.Cl.G01N30/89(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书3页说明书3页附图3页附图3页(54)发明名称一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法(57)摘要本发明公开了一种利用反相高效液相色谱-ELSD法检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠含量的方法。其特点在于：利用乙醇超声提取胆汁中的牛磺鹅去氧胆酸钠，制成供试品溶液；然后吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，采用反相高效液相色谱-ELSD法测定，用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱，乙腈-三乙胺水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温25℃，用ELSD检测，根据样品的保留时间和色谱图进行定性分析，根据峰面积进行定量分析。该方法的优点在于：操作简便、精密度高、重现性好，可用于检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠。CN103675187ACN1036758ACN103675187A权利要求书1/1页1.一种利用反相高效液相色谱—ELSD法检测胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将胆汁用乙醇超声提取；(2)将提取液过滤，得到供试品溶液；(3)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱；(4)高效液相色谱仪设置如下：采用乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速为1ml/min；柱温25℃；进样量20μl；(5)ELSD检测器设置如下：雾化温度105℃，气体流速3L/min。2.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(1)中，所用的溶剂为纯乙醇，超声时间为20min(220W，40kHz)。3.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(2)中，所用的滤膜为0.45μm。4.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(3)中，所用的固定相是十八烷基硅烷键合硅胶。5.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(4)中，所用的流动相为乙腈：0.03％三乙胺水溶液，梯度洗脱。6.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(4)中，样品的进样量可以是10～100μl之间。7.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，使用ELSD检测器。8.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，ELSD雾化温度为105℃。9.根据权利要求1所述的一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的检测方法，其特征在于在步骤(5)中，ELSD气体流速为3L/min。2CN103675187A说明书1/3页一种胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法技术领域[0001]本发明涉及一种从胆汁中检测牛磺鹅去氧胆酸钠(Sodiumtaurochenodeoxycholate)含量的方法，属于医药技术领域。背景技术[0002]胆汁酸盐是胆汁的主要活性成分，主要有清热解毒、化痰利湿等作用[0003]牛磺鹅去氧胆酸钠，分子式为：C26H44NNaO6S，分子量521.68，CAS号为6009-98-9，其结构如图：[0004][0005]现有检测方法灵敏度较低、重复性较差，不适合用于检测胆汁中的牛磺鹅去氧胆酸钠。因此有必要探索出更易操作、更准确的含量测定方法。发明内容[0006]本发明的目的是提供一种易操作、准确度高的胆汁中牛磺鹅去氧胆酸钠的含量测定方法。[0007]本发明可以通过下列步骤来实现：[0008](1)将胆汁用乙醇超声提取。[0009](2)将提取液过滤，得到供试品溶液。[0010](3)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱。[0011](4)高效液相色谱仪设置如下：采用乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脱，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速为1ml/min；柱温25℃；进样量20μ1；[0012](5)ELSD检测器设置如下：雾化温度105℃，气体流速3L/min。[0013]在步骤(1)中，所用的溶剂为纯乙醇，超声时间为20min(220W，40kHz)。[0014]在步骤(2)中，所用的滤膜为0.45μm。[0015]在步骤(3)中，所用的固定相是十八烷基硅烷键合硅胶。[0016]在