一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105891351A(43)申请公布日2016.08.24(21)申请号201610192203.4(22)申请日2016.03.30(71)申请人中山百灵生物技术有限公司地址528400广东省中山市火炬开发区九洲大道28号(72)发明人娄良(74)专利代理机构中山市兴华粤专利代理有限公司44345代理人吴剑锋(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/62(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法(57)摘要本发明公开了一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸，包括：制备对照品溶液和对照品供试品溶液；分别注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺熊去氧胆酸的峰面积，按照外标法，以无水牛磺熊去氧胆酸来计算HPLC含量；制备杂质对照品溶液和样品溶液；分别注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的峰面积，再按照外标法计算牛磺熊去氧胆酸样品中有关物质的大小。本发明采用高效液相色谱法应用RID检测器。在同一个液相色谱条件下有效的分离和准确定量检测牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸两种极性相差比较大的胆酸类物质。CN105891351ACN105891351A权利要求书1/1页1.一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸，其特征在于包括以下步骤：A、取牛磺熊去氧胆酸-sigma对照品为已知对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.5mg/ml的对照品溶液，取牛磺熊去氧胆酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.5ml/ml的对照品供试品溶液；B、分别取对照品溶液对照品供试品溶液各20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺熊去氧胆酸的峰面积，按照外标法，以无水牛磺熊去氧胆酸来计算HPLC含量，不小于99％；C、取中检所对照品牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸，再用流动相溶解成浓度为5ug/ml的杂质对照品溶液，取牛磺熊去氧胆酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.5mg/ml的样品溶液；D、分别取杂质对照品溶液、样品溶液各20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的峰面积，再按照外标法计算牛磺熊去氧胆酸样品中有关物质的大小，牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸不超过1.0％和0.5％。2.根据权利要求1所述新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述流动相按以下方法制得：按0.1mol/L氯化铵水溶液：四氢呋喃：甲醇＝5:2:3的比例混合后，用三乙胺调节溶液pH为7.00。3.根据权利要求1或2所述新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述的液相色谱仪中采用C4色谱柱，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，检测器采用示差折光检测器。4.根据权利要求3所述新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，其特征在于所述的稀释剂为流动相。5.根据权利要求3所述新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，其特征在于还包括有系统适应性测定：分别取约25mg牛磺熊去氧胆酸，牛磺鹅去氧胆酸，熊去氧胆酸对照品用稀释剂溶解，摇匀并定容到50ml；取20ul进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数，分离度的大小要不小于1.5，理论踏板数不小于1500。2CN105891351A说明书1/7页一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法。背景技术[0002]牛磺熊去氧胆酸(牛磺熊去氧胆酸)化学名称为3α，7β二羟基胆烷酰-N-牛磺酸，是由熊去氧胆酸(熊去氧胆酸)的羧基与牛磺酸的氨基之间缩水而成的结合型胆汁酸。1902年自熊胆中发现牛磺熊去氧胆酸，其为熊胆中主要胆汁酸，具有解痉、抗惊厥、抗炎及溶胆石等作用。牛磺熊去氧胆酸是熊胆汁的有效成分，化学名为2-[[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基-24-氧代胆甾烷-24-基]氨基]乙烷磺酸二水合物。临床主要用于治疗胆囊胆固醇结石、原发硬化性胆管炎、原发胆汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎等。临床研究表明，牛磺熊去氧胆酸与传统的胆石溶解药熊去氧胆酸相比，存在以下优点1、溶石速度加快、全溶率提高，且无明显的不良反应。2、牛磺熊去氧胆酸具有水溶性和醇溶性，相对于熊去氧胆酸在体内吸收速度快。[0003]现有的文献和发明关于高效液相测定牛磺熊去氧胆酸的含量和其中有关物质大小主要有以下三个文献和发明。[0004]1：“HPLC-ELSD法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量”(赵勇、咎丽霞、孙文基；《药物分析杂志》，2006，26(1),127)[0005]2：“高效液